Purification and determination of inhibitory activity of recombinant soyacystatin against papain and fish protease

Rekombinant soyasistatinin saflaştırılması ve papaine ve balık proteazlarına karşı inhibitör aktivitesinin saptanması

Özet

Rekombinant (r-) soyasistatinin papaine olan inhibitor aktivitesi karakterize edilerek yumurta beyazı sistatini ile karşılaştırılmıştır. E.coli de sentezlenen r-soyasistatin 4.33 kez saf rekombinant protein biçiminde phenyl-Sepharose ve DEAE kolonları ile saflaştırılmıştır. Yumurta beyazı sistatin ise cm-papain-sepharose afînite kromatografısi kullanılarak saflaştırılm ıştır. Araştırmada, 2 ug papainin %50 sini inhibe etmek için gereken soyasistatin miktarı 0.245 ug ve yumurta beyazı sistatin miktarı ise 0.310 ug dır. r-Soyasistatın araştırmada kullanılan balık kasmdaki otolitik aktivitenin %90 nu inhibe etmiştir.

Abstract

Recombinant (r-) soyacystatin was characterized for its inhibitory activity against papain and compared to egg white cystatiri. r-Soyacystatin expressed in E. coli was purified with phenyl-Sepharose and DEAE 4.33 fold as a recombinant protein. Egg white cystatin was purified by using affinity chromatography on cm-papain-Sepharose. Inhibitory activity of r-soyacystatin was similar to that of egg white cystatin. The amount required to inhibit 50% activity of papain used in the assay, 2 ug, was 0.245 ug and 0.310 ug for soyacystatin and egg white cystatin, respectively. r-Soyacystatin inhibited 90% of autolytic activity in fish muscle.