Farede östrus siklusu tayininde hızlı, kolay ve etkin bir yöntem

Özet

Östrus siklusu kemirgen (rodent) dişide üreme hormon değişikliği ile tekrarlanan fizyolojik libido değişiklikleridir. Bu dönem fare gibi kemirgenlerde kısadır. Sadece 4 veya 5 gün sürer. Farede östrus siklusunun belirlenmesi farenin çiftleşme dönemini belirler. Gebeliğin başlangıcının tayininde önemlidir. Bu dönemin kısa olması üreme ile ilgili çalışmalarda kemirgenlerin kullanılmasını avantajlı hale getirmektedir. Ancak farelerde bu dönemin tespiti zor olduğu için çalışmalarda çoğunlukla ratlar tercih edilmiştir. Son yıllarda genetiği değiştirilmiş farelerin tıp alanındaki araştırmalarda kullanımı hızla artmaktadır. Bu nedenle farelerde östrus siklusunun tayini önem kazanmıştır. Bu yöntemde vajinal örnek alma ve örnekten yapılan vajinal yaymada hücre tipinin mikroskop altında belirlenmesi esastır. Bu konuda literatürde birçok farklı çalışma vardır. Bu yöntemin ilk aşaması için vajinal sürüntü alma metodları önerilmektedir. Vajinal yayma aşamasında hücre tipinin mikroskopta tayininde boyama yapmadan değerlendiren metodlar vardır. Bazı metodlarda boya olarak farklı kimyasallar önerilmektedir. Biz laboratuarımızda fare üreme döngüsü tayininde hızlı, uygulaması kolay ve etkin bir yöntem geliştirdik. Fare vajinal yaymada sürüntü alma yerine vajinal yıkama yaptık. Vajinal hücrelerden yapılan yaymada oldukça basit bir boyama yöntemi olan toluidin mavisi kullandık. Değerlendirmeyi ışık mikroskobu altında yaptık. Bu yöntemle hamilelik oranları istatistiksel olarak artmış, hamilelik zamanı tam olarak bilindiğinden istenilen dönem oosit ve embriyo eldesi mümkün olmuştur. Buradan çıkarımla fare östrus siklusunun saptanmasında modifiye ederek kullandığımız bu yöntem diğer yöntemlere göre daha hızlı, kolay ve değerlendirme aşamasında daha etkindir

Abstract

An easy and effective methodology in defining the estrous cycle in miceestrous cycle is a recurring physiologic change in libido, which is induced by reproductive hormones in rodents. This cycle is very short in rodents including mice. It persists for 4 or 5 days. Defining the estrous cycle is important for specifying the exact time of the mating period. It represents the beginning of the pregnancy in mice. Having short time period in estrous cycle makes the rodents in advantage in reproductive studies. Because of the difficulties in uses of this technique in mice, generally rats are preferred. The uses of genetically engineered mice increase in resent medical research studies. So, it makes important the determining of estrus cycle in mice. The main steps of the procedures are the obtaining of vaginal samples for having vaginal smear and the determination of the cell types in vaginal smear under the microscope. There are many different studies about this topic in the literature. Vaginal swap methodologies are favorable for the first step of these procedures. In the determination of the cell types from vaginal smears, some methodologies prefer the analyses of cell types under microscope without any staining. In other methodologies, some chemicals prefer for the staining of the cells obtained from vaginal smears. In our lab, a rapid, simple and effective methodology was established in the determination of estrous cycle in mice. Vaginal washing methodology was applied in first step instead of vaginal swap methodology. In the preparation of mouse vaginal smear, toluidine blue was used for staining. In the evaluation of cell types, light microscope was used. By this methodology, the pregnancy ratios were increased statistically and it is possible to obtain the oocyte and embryo of desired date by knowing the exact time of pregnancy. These findings represented that our modified methodology is more rapid and easier in the application and more effective in the evaluation than other methodologies in defining the estrous cycle in mice