Fareden elde edilen mezenkimal kök hücre hücreler hücre kültüründe erken dönemde yüksek canlılık ve köklülük özellikleri gösterirler

Mesenchymal stem cells obtained from mouse represents high viability and steamness properties in the early phase of cell culture

Zehra Dilşad ÇOBAN,Hüseyin GÜZEL,Akın DEMİRCAN,Merve ARSLAN,Fatıma Sümeyye DEMİRHAN,Naci KARAAĞAÇ,Nurullah BABAYİĞİT,Melih ÖVEÇ,Emin SÖNMEZ,Mahmut KAYNAK,Ramazan BAL,Murat YURDAKUL,Mustafa SATMAN,Muhammed Fatih ADA,Tarık Ziya AKYÜZ,Mehmet Murşit CEYLAN,Abdülkadir DAŞTAN,Nesim FARAHMAND,ŞEFİK GÜRAN

Özet

Farklanmamış yapıda hücre olarak kök hücre, farklanma yeteneği ile özel hücrelere dönerler (pluripotency) ve mitoz ile bölünerek kendi benzeri birçok kök hücre oluştururlar (self renewal). Erişkin organizmada bulunan mezenkimal kök hücreler multipotent yapıdadır ve birçok hücreye farklanırlar. Genellikle doku tamir mekanizmasını yönlendirirler. Bu hücrelerin pluripotensi kapasitesine bağlı olarak doku mühendisliği protokollerinde yaygın kullanımı vardır. Bilindiği gibi doku mühendisliği yıpranmış dokuların tamir ve rejenerasyonunda yeni tedavi yaklaşımları sağlamaktadır. Çalışmamızda kemik iliğinden farklanmış fare mezenkimal kök hücrelerin elde edilmesi amaçlanmıştır. Bu amaçla fareden (mus musculus) kemik iliği örnekleri alınmış, uzun süreli kemik iliği kültüründe mezenkimal kök hücreler elde edilmiştir. Mikroskopta kök hücrelere özgün koloni oluşumu (colony forming) takip edilmiştir. Hücrelerin hücre kültüründe erken dönem (10-12 gün) ve geç dönem (18-20 gün) canlılık oranları tripan blue yöntemi ve MTT analizi ile incelenmiştir. Mezenkimal kök hücrelere özgün köklülük özelliklerini göstermek için genetik markır (belirteç) olarak CD73, CD90, CD105, CD34, CD45, CD11b genleri kullanılmıştır. Bu aşamada tanımlanan genlere ait gen ekspresyon profilleri "real time polymerase chain reaction" yöntemi ile ortaya konmuştur. Mezenkimal kök hücrelerin canlılık oranları ve markır genlere ait ekspresyon düzeyleri erken dönem kültürde geç döneme göre daha yüksek bulunmuştur. Sonuçlar uygulanan yöntem ile fare kemik iliğinden mezenkimal kök hücre eldesinin mümkün olduğunu göstermektedir. Hücrelerin en yüksek canlılık ve köklülük özellikleri gösterdiği evre hücre kültüründe erken dönemdir. Hücreler hücre kültüründe ileri evrelerde canlılık ve köklülük özelliklerini kaybetmektedir. Bu bulgu erken dönem hücre kültüründen elde edilen mezenkimal kök hücrelerin ileri kök hücre uygulamalarında kullanılabileceğinin göstergesidir

Abstract

Mesenchymal stem cells obtained from mouse represents high viability and steamness properties in the early phase of cell culture As an undifferentiated cell, stem cell can differentiate into specialized cells (pluripotency) and can divide with mitosis to produce more stem cells (self renewal). Mesenchymal stem cells obtain in adult organisms are multipotent cells that can differentiate into a variety of cell types. They generally coordinate tissue repair mechanism. So, they use widely in tissue engineering protocols because of their pluripotency capacity. As known tissue engineering is a promising therapeutic approach to repair or regenerate damaged tissues. In our study, we aimed to obtain mouse bone marrow derived mesenchymal stem cells from bone marrow. First, bone marrow samples were obtained from mouse (mus musculus), by using long-term bone marrow culture methodology, mesenchymal stem cells were obtained. In microscope, colony forming, specific for mesenchymal stem cells were visualized. The cells in cell culture were analyzed for cell viability with trypan blue and MTT analyses in early phase of culture and late phase of culture. CD73, CD90, CD105, CD34, CD45, CD11b genes were used as genetic marker for finding the stemness properties of mesenchymal stem cells. In that step, the expression profiles of these genes were found by using real time polymerase chain reaction analyses. The cell viability and the gene expression Results of cultured cells in early phase were found higher than the Results of cultured cells in late phase. The Results represent that the methodology applied in our study is proper for having mesenchymal stem cells from bone marrow. The cultured cells have high viability and stemness properties in the early phase of cell culture. The cells lose their vitality and stemness properties in the late phase of cell culture. This finding represents that mesenchymal stem cells obtained from in the early stages of culture could be used in the advanced application of stem cells.