Oryza sativa Osmyb4 geni aktarılmış transgenik patateste Osmyb4 gen ifadesinin tuzluluk toleransına etkisi

Effect of Osmyb4 gene expression on salinity tolerance of potato transformed with Oryza sativa Osmyb4 gene

Özet

Bu çalışmada Osmyb4 geni ile transforme edilmiş patateste, MYB4’ün tuz toleransına olan potansiyel etkileri araştırılmıştır. Daha önce yapmış olduğumuz bir çalışmada Osmyb4 geni aktarılmış transgenik patates bitkilerinin yüksek konsantrasyonda tuz içeren ortamda, gen aktarılmamış bitkilerden daha iyi fizyolojik gelişim gösterdiği tespit edilmiştir. Bu noktadan hareketle MYB4’ün patateste tuz toleransına etkisini araştırmak amacıyla, transgenik bitkiler (TR) ve gen aktarılmamış bitkiler (WT) 300 mM tuz stresine tabi tutularak elektrolit salınımı, malondialdehit (MDA) miktarı, nispi su içeriği (RWC), hidrojen peroksit (H2O2) konsantrasyonu, klorofil içeriği ve prolin miktarı belirlenmiştir. Bunların yanı sıra literatürde tuz stresi ile ilişkili olduğu belirtilen NAC072, NAC024, CDPK4 ve P5CS genlerinin ekspresyonu gerçek zamanlı kantitatif PCR (qRT PCR) aracılığı ile incelenmiştir. Biyokimyasal analizler sonucunda elde edilen veriler elektrolit salınımı, prolin miktarı ve H2O2 miktarı bakımından WT bitkiler ile TR bitkiler arasında anlamlı bir farklılık olmadığını ortaya koymuştur. RWC transgenik S2 hattında transgenik olmayan bitkilere kıyasla anlamlı oranda (P < 0.05) yüksek bulunmuştur. MDA miktarı her iki transgenik hatta (S2 ve M48) WT bitkilere kıyasla anlamlı oranda düşük bulunmuştur. qPCR analizi sonucunda elde edilen relatif ekspresyon değerleri, S2’de NAC072 geninin ekspresyon seviyesinin WT ile karşılaştırıldığında anlamlı olarak (P < 0.05) yüksek olduğunu göstermiştir. NAC024 ve P5CS genlerinin ekspresyon seviyeleri de transgenik bitkilerde transgenik olmayanlara oranla yüksek bulunmuştur. CDPK4 geninin ekspresyon seviyesi ise S2 bitkileri ile WT bitkilerde birbirine yakın seviyede tespit edilmiştir. Elde edilen veriler bir bütün olarak değerlendirildiğinde MYB4 transkripsiyon faktörünün RWC, MDA miktarı ve stresle ilişkili çeşitli genlerin ekspresyon seviyesini etkilemek suretiyle tuz stresi tolerans mekanizmasında rol oynayabileceğine işaret etmiştir.

Abstract

In this study, potential involvement of MYB4 in salt tolerance of potato trasformed with Osmyb4 was investigated. In our previous studies transgenic potato plants heterologously expressing Osmyb4 gene displayed better growth compared to non-transgenic plants upon exposure to high salt concentrations. These results have led to a detailed analysis of potential involvement of MYB4 in salt tolerance of potato. For this purpose transgenic (TR) and non-transgenic (WT) plants were subjected to 300 mM salt concentrations and electrolyte leakage, malonedialdehyde level (MDA), relative water content (RWC), the amount of hydrogen peroxide (H2O2), chlorophyll content and the level of proline was identified. The expression of certain genes reported to be involved in salinity tolerance, namely, NAC072, NAC024, CDPK4 and P5CS was also investigated by quantitative real time PCR (qRT-PCR). The data obtained through biochemical tests showed that there were no significant difference between WT and TR plants with respect to electrolyte leakage, proline content and H2O2 content. RWC was significantly higher (P <0.05) in the transgenic line S2 compared to TR plants. MDA content in both transgenic lines (S2 and M48) were found to be significantly lower compared to WT plants. Relative expression data obtained by qPCR analysis revealed that expression of NAC072 was significantly higher in S2 compared to WT (P < 0.05). Expression level of NAC024 and P5CS genes were also higher in transgenic plants compared to non-transgenic WT. On the other hand expression level of CDPK4 was similar in WT and transgenic lines. The results have indicated that MYB4 transcription factor may regulate salt stress tolerance mechanism in potato by affecting RWC, MDA content and expression of certain stress related genes.