Sıçan miyokard fibroblastlarında Col1α1’in RNAi tarafından gen susturulması

Amaç & Hipotez:Amaç: Kollajen tip I alfa 1 (Col1α1) sadece hücre matrisi için bir iskele görevi görmez, aynı zamanda miyokard fibrozisinde rol oynar.

📊

Temel Bulgular & Veri:Bu çalışmanın amacı, sıçan Col1α1 genine özgü etkili bir shRNA’yı taramaktır.

💡

Sonuç & Katkı:Bulgular: Restriksiyon enzimi kesimi ve DNA dizilimi analizinin gösterdiği gibi Col1α1’i hedef alan üç shRNA ekspresyon plazmidi başarıyla yapıldı.

🔬Tür:Araştırma Makalesi

📍Kapsam:Genişletilmiş Akademik Örneklem

⚙️Değişkenler:Alan Parametreleri

Özet

Amaç: Kollajen tip I alfa 1 (Col1α1) sadece hücre matrisi için bir iskele görevi görmez, aynı zamanda miyokard fibrozisinde rol oynar. Bu çalışmanın amacı, sıçan Col1α1 genine özgü etkili bir shRNA’yı taramaktır. Yöntem: Col1α1’i hedefleyen shRNA ekspresyon plazmidleri üretildi ve nakavt verimleri qPCR ve Western blot ile incelendi. Bulgular: Restriksiyon enzimi kesimi ve DNA dizilimi analizinin gösterdiği gibi Col1α1’i hedef alan üç shRNA ekspresyon plazmidi başarıyla yapıldı. Col1α1 shRNA ifade eden plazmidler daha sonra, yüksek verimde sıçan kardiyak fibroblastlarına transfekte edildi. qPCR ve Western blot sonuçları, hem mRNA hem de protein seviyesinde Col1α1 ekspresyonunun, shRNA ile transfekte edilmiş hücrelerde, karıştırılmış shRNA ile transfekte edilmiş hücrelere kıyasla, önemli ölçüde inhibe edildiğini (p < 0.05) göstermiştir. Sonuç: Col1α1’e özgü gen susturma etkinliği yüksek bir shRNA başarıyla elde edildi. Col1α1 shRNA eksprese eden plazmidin üretimi, Col1α1 geninin miyokardiyal fibrozisteki rolü üzerine yapılacak sonraki araştırmaların temelini oluşturmaktadır

Abstract

Objective: The collagen type I alpha 1 (Col1α1) not onlyacts as a scaffold for the cell matrix, but also is involved inmyocardial fibrosis. The purpose of this study is to screenan efficient shRNA specific to rat Col1α1 gene.Methods: The shRNA expression plasmids targetingCol1α1 were constructed and their knockdown efficiencywas examined by qPCR and Western blot.Results: Three shRNA expression plasmids targetingCol1α1 were successfully constructed, as suggested byanalysis of restriction enzyme digestion and DNA sequencing. The Col1α1 shRNA-expressing plasmids were thentransfected into rat cardiac fibroblasts with high efficiency.The qPCR and Western blotting results demonstrated thatCol1α1 expression at both mRNA and protein level was significantly inhibited (p < 0.05) in shRNA-transfected cellscompared to scrambled shRNA-transfected cells.Conclusion: A Col1α1-specific shRNA with high efficiencyof gene silencing is successfully obtained. The construction of Col1α1 shRNA-expressing plasmid lays the foundation for the further studies on the role of Col1α1 gene inmyocardial fibrosis.

🔖

Bu Makaleye Atıf Yap

Lİ, J., Lİ, Y., ZHANG, G., HE, Z. (2022). Sıçan miyokard fibroblastlarında Col1α1’in RNAi tarafından gen susturulması. Türk Biyokimya Dergisi, Cilt: 44 - Sayı: 6, 803–809. https://ajindex.com/articles/620827

📄 Tam Metin PDF Okuyucu

Yeni Sekmede Aç ↗

↗Yeni Sekme

📄

PDF görüntüleyici hazırlanıyor...

Kaynakça (13)

Kong P, Christia P, Saxena A, Su Y, Frangogiannis NG. The pathogenesis of cardiac fibrosis. Cel Mol Life Sci 2014;71:549–74
Dobaczewski M, de Haan JJ, Frangogiannis NG. The extracellular matrix modulates fibroblast phenotype and function in the infarcted myocardium. J Cardiovasc Transl Res 2012;5:837–47
Tang M, Zhong M, Shang Y, Lin H, Deng J, Jiang H, et al. Differential regulation of collagen types I and III expression in cardiac fibroblasts by AGEs through TRB3/MAPK signaling pathway. Cell Mol Life Sci 2008;5:2924–32
Marchesi C, Essalmani R, Lemarié CA, Leibovitz E, Ebrahimian T, Paradis P, et al. Inactivation of endothelial proprotein convertase 5/6 decreases collagen deposition in the cardiovascular system: role of fibroblast autophagy. J Mol Med (Berl) 2011;89:1103–11
Cheng R, Dang R, Zhou Y, Ding M, Hua H. MicroRNA-98 inhibits TGF-β1-induced differentiation and collagen production of cardiac fibroblasts by targeting TGFBR1. Human Cell 2017;30:192–200
Civitarese RA, Kapus A, McCulloch CA, Connelly KA. Role of integrins in mediating cardiac fibroblast–cardiomyocyte cross talk: a dynamic relationship in cardiac biology and pathophysiology. Basic Res Cardiol 2017;112:6
Karna E1, Szoka L, Palka JA. The mechanism of hydralazineinduced collagen biosynthesis in cultured fibroblasts. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol 2013;386:303–9
Ma Y, de Castro Brás LE, Toba H, Iyer RP, Hall ME, Winniford MD, et al. Myofibroblasts and the extracellular matrix network in post-myocardial infarction cardiac remodeling. Pflugers Arch 2014;466:1113–22
Frangogiannis NG. Fibroblasts and the extracellular matrix in right ventricular disease. Cardiovasc Res 2017;113:1453–64
Roldão JA, Beghini M, Ramalho LS, Porto CS, Rodrigues DB, Teixeira VP, et al. Comparison between the collagen intensity and mast cell density in the lingual muscles and myocardium of autopsied chronic chagasic and nonchagasic patients. Parasitol Res 2012;111:647–54
McDonald LT, Zile MR, Zhang Y, Van Laer AO, Baicu CF, Stroud RE, et al. Increased macrophage-derived SPARC precedes collagen deposition in myocardial fibrosis. Am J Physiol Heart Circ Physiol 2018;315:H92–100
Jenkins C, Milsted A, Doane K, Meszaros G, Toot J, Ely D. A cell culture model using rat coronary artery adventitial fibroblasts to measure collagen production. BMC Cardiovas Disord 2007;7:13
Zhang Y, Wang J, Li H, Yuan L, Wang L, Wu B, et al. Hydrogen sulfide suppresses transforming growt