Model Organizma Galleria mellonella’ da Hemolenf ve Dokudan Düşük Maliyetli ve Basit DNA İzolasyon Metodu

Abstract

Bu çalışmanın amacı, rutin laboratuvar çalışmalarında sıklıkla kullanılan ekonomik kimyasalları ve sarf malzemeleri kullanarak dokudan ve vücut sıvılarından mevcut izolasyon yöntemlerine alternatif, polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) işlemlerinde kullanılmak üzere gDNA izolasyon yöntemi oluşturmaktır. Bu amaçla model organizma olarak Galleria mellonella L. (Lepidoptera: Pyralidae) kullanılmıştır. Çalışmada, oluşturduğumuz yöntemle karşılaştırma yapabilmek için iki farklı DNA izolasyon yöntemi de uygulanmıştır. İzolasyonu yapılan DNA’ ların miktar ve saflığı 260 nm ve 260 nm/280 nm’ de spektrofotometrik ölçümlerle belirlenmiş ve agaroz jel elektroforezi ile kontrolleri yapılmıştır. Fenolsüz ve santrifüjsüz yöntem, InstaGene matrix yöntemi ve bazı modifikasyonlar yaparak oluşturduğumuz DNA izolasyon yöntemi ile hemolenf örneğinden elde edilen A260 değerleri sırasıyla 0,032, 0,157, 0,432; doku örneğinden elde edilen A260 değerleri ise sırasıyla 0,291, 0,121, 0,346 bulunmuştur. Saflık değerleri ise hemolenf grubunda sırasıyla 1,030, 1,401, 1,878; doku grubunda ise 1,785, 1,690, 2,011 olarak tespit edilmiştir. Sonuç olarak modifiye edilerek oluşturduğumuz yöntem ile hem vücut sıvısından hem de dokudan yeterli miktar ve kalitede DNA elde edilebildiği tespit edilmiştir.