Analytical Method Development and Validation for Simultaneous Determination of Simvastatin and Mupirocin Using Reverse-Phase High-pressure Liquid Chromatographic Method

Ters Faz Yüksek Basınçlı Sıvı Kromatografik Yöntem Kullanılarak Simvastatin ve Mupirosin Eşzamanlı Belirlenmesi için Analitik Yöntem Geliştirme ve Validasyon

Abstract

Objectives: This study was aimed to develop and validate the use of reverse-phase high pressure liquid chromatographic method for the estimation of simvastatin (SIM) and mupirocin (MUP) simultaneously. Materials and Methods: The chromatographic method developed is optimized for flow rate with the column, solvent, and buffer used and mobile phase ratio, molarity, and pH. The validation of the optimized method and the forced degradation studies of both drugs (under acidic, alkaline, oxidation, heat, light, and neutral conditions) were conducted following the The International Council for Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use guidelines. Results: Kromasil C18 column (250 mm × 4.6 mm, 5 µm) with ultraviolet detection at 224 nm and acetonitrile/phosphate buffer (30 mM, 70:30 v/v, pH 3.5; adjustment done using orthophosphoric acid) as mobile phase at a flow rate of 1.1 mL/min were observed to provide a good resolution for MUP and SIM at retention times of 2.32±0.008 and 13.55±0.254 min, respectively, with high accuracy (percent recovery was 99.69±0.82 for MUP and 101.10±0.02 for SIM) and linearity in the range of 5-30 µg/mL (r2 : 0.9969 for MUP and r2 : 0.9959 for SIM). The diagnostic limit and the lower limit of determination were 0.771±0.234 and 2.338±0.246 μg/mL for MUP and 0.595±0.282 and 1.803±0.334 µg/mL for SIM, respectively. The validated method was used to understand the degradation behavior of both drugs after the forced degradation studies. Conclusion: The analytical method developed is determined to be specific, sensitive, precise, and accurate for the estimation of MUP and SIM simultaneously in the combined dosage form.

Özet

Amaç: Bu çalışmanın amacı, simvastatin (SIM) ve mupirosin (MUP) tahmininde eş zamanlı olarak ters fazlı yüksek performanslı sıvı kromatografik yöntemin kullanımını geliştirmek ve doğrulamaktır. Gereç ve Yöntemler: Geliştirilen kromatografik yöntem kolon, çözücü ve tampon kullanılan akış hızı, mobil faz oranı, molarite ve pH için optimize edilmiştir. Optimize edilmiş yöntemin doğrulanması ve her iki uyuşturucunun (asidik, alkali, oksidatif, termal, ışık ve nötr koşullar için) zorunlu bozunma çalışmaları İnsan Kullanımına Yönelik Farmasötikler için Teknik Gereksinimlerin Uyumlaştırılması Uluslararası Konseyi yönergelerine göre gerçekleştirilmiştir. Bulgular: Ultraviyole saptaması 224 nm’deki C18 kolon (kromasil; 250 mm × 4,6 mm, 5 µm) ve mobil fazda 1,1 mL/dk akış hızında ortofosforik asit ile ayarlanmış pH 3,5 asetonitril: fosfat tamponunun (30 mM) (70:30 v/v) MUP ve SIM çözünürlüğünü sırasıyla 2,32±0,008 dk ve 13,55±0,254 dk tutma sürelerinde yüksek doğrusallık (% geri kazanım, MUP için 99,69±0,82 ve SIM için 101,10±0,02) ve 5-30 μg/mL aralığında doğrusallık ile (MUP için r2 : 0,9969 ve SIM için r2 : 0,9959) sağladığı bulunmuştur. Tespit limiti ve kantitasyon limiti sırasıyla MUP için 0,771±0,234 ve 2,338±0,246 μg/ mL, SIM için 0,595±0,282 ve 1,803±0,334 µg/mL olarak bulunmuştur. Valide yöntem, zorunlu bozunma çalışmalarından sonra her iki ilacın bozunma davranışını anlamak için kullanılmıştır. Sonuç: Geliştirilen analitik yöntemin, kombine dozaj formunda MUP ve SIM’nin aynı anda tahmini için spesifik, hassas, kesin ve doğru olduğu belirlenmiştir.