Diyette bulunan fitoöstrojenlerin fare testisi üzerindeki etkileri: Elektron mikroskopisi ve kaspaz-3 immun boyama ile yapilan değerlendirme

Effects of dietary phytoestrogens on mouse testis: Evaluation by electron microscopy and caspase-3 immunostaining

Abstract

OBJECTIVE: The purpose of this study was to evaluate the effects of dietary phytoestrogens on mouse testis using light and electron microscopy and Caspase-3 immunostaining. MATERIALS-METHODS: Eighteen male Swiss Albino mice of 3-weeks-old were separated into three groups, each including six mice, after weaning at postnatal 21st day. They were fed by three different diets; a phytoestrogen-free diet (phyto-0 group), a diet containing 500 µg/g phytoestrogen (phyto-500 group) or a diet containing 1000 µg/g phytoestrogen (phyto-1000 or phyto-rich group) for 6 weeks. After completing their sexual maturity on day 63, all were sacrificed under anesthesia. Extracted testes were prepared for investigation by light and electron microscopy and Caspase-3 immunostaining was used to demonstrate the apoptosis. RESULTS: During the study period, all mice in three dietary groups increased their weights regularly, but there was no statistically significant difference among groups for each week. Histological examination was normal in fhyto-0 diet group by light and electron microscopy, and Caspase- 3 immunostaining showed no increased apoptosis. The phyto-500 and phyto-1000 diet caused a series of changes in the testis including increased apoptosis in the germ cells, increased edema in interstitial area, deposition of hyaline-like substance and increased lipid deposition in Leydig cells. These changes were more obvious in phyto-1000 group. The results of immunostaining by Caspase-3 showed that apoptosis significantly increased in primary spermatocytes in both phyto-500 and phyto-1000 groups when compared to phyto-0 group (p=0.000). CONCLUSION: Our results suggested that phytoestrogens might have detrimental effects on male reproductive function in a dose dependent manner.

Özet

AMAÇ: Bu çalışmanın amacı diyette bulunan fitoöstrojenlerin fare testisi üzerindeki etkilerini ışık ve elektron mikroskobu ve Caspase-3 immun boyama ile araştırmaktır. MATERYAL-METOD: Onsekiz Swiss Albino erkek fare 21 günlük iken sütten kesilerek üç gruba ayrıldılar. Bu üç gruptaki fareler fitoöstrojen içermeyen (Fito-0 grubu) diyet, 500 µg/g fitoöstrojen içeren diyet (Fito-500 grubu) ve 1000 µg/g fitoöstrojen içeren diyet (Fito-1000 grubu) olmak üzere 3 farklı diyet ile 6 hafta süreyle beslendiler. 63. günde cinsel olgunluklarını tamamladıktan sonra tüm fareler anestezi altında iken çıkarılan testisler ışık ve elektron mikroskopi ile incelenmek ve apoptozisi göstermek üzere Caspase-3 immun boyama yapmak üzere hazırlandılar. SONUÇLAR: Her üç diyet grubundaki farelerin çalışma süresince ağırlıkları düzenli olarak artış gösterdi, ancak her bir hafta için gruplar arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark gözlenmedi. Fito-0 grubunda ışık ve elektron mikroskobi bulguları normaldi ve Caspase-3 ile artmış apoptosis gözlenmedi. Fito-500 ve Fito-1000 diyet ise testislerde germ hücrelerinde artmış apoptosis, interstisiyel alanda artmış ödem, hyalin benzeri madde birikimi ve Leydig hücrelerinde artmış Lipit birikimi olmak üzere bir seri değişikliğe neden oldu. Bu değişiklikler Fito-1000 grubunda daha belirgindi. Caspase-3 ile yapılan immune boyama primer spermatositlerde hem Fito-500 hem de Fito-1000 grubunda Fito-0 grubuna oranla istatistiksel olarak anlamlı düzeyde artmış apoptosis gösterdi (p=0.000) SONUÇ: Bulgularımız fitoöstrojenlerin doza bağlı olacak şekilde erkek üreme sistemi fonksiyonları üzerinde olumsuz etkilerinin olabileceğini düşündürmektedir.