Interaction of chronic B-cell leukemia cells with CD4+ and CD8+ T cells in vitro and the effect of interferon-$alpha$

B-kronik lenfositik lösemi hücrelerinin in vitro CD4+ ve CD8+ T hücreleri ile etkileşimi ve interferon-$alpha$' nın etkisi

Bülent ÜNDAR, İlhan ÖZTOP, Filiz VURAL, Fatih DEMİRKAN, Hayri G. ÖZSAN, Mehmet A. ÖZCAN, Halil ATEŞ

Abstract

Interaction of chronic B-cell leucemia cells with CD4+ and CD8+ T cells in vitro and the effect of interferon-$alpha$ Altough interferon-$alpha$ (IFN-$alpha$) is an effective agent in chronic lymphocytic leukemia (CLL) in vivo, it protects CLL cells from apoptosis in vitro. In our study we investigated the in vitro effectiveness of IFN-$alpha$ in B-CLL. Positive cell selection for CD4+ and CD8+ T cells was performed from peripheral blood mononuclear cells of 2 CLL patients and 2 healthy controls. B-CLL cells were cultured in mediums containing or not containing IFN-$alpha$ in the following conditions: 1) B-CLL cells only 2) with autologous or allogeneic CD4+ and CD8+ cells in transwell system 3) with autologous CD4+ and CD8+ cells in a cell to cell direct contact system. Fas (CD95), CD40 and annexin-V expressions of the cells were studied by flow-cytometry at the beginning and after 72 hours of culture. Both baseline and post-culture fas expressions were low in B-CLL cells. Post culture CD40 expressions of B-CLL cells decreased significantly in all culture conditions. When B-CLL cells were in direct contact with T cells, annexin V expressions were decreased. However addition of IFN-$alpha$ to these mediums increased annexin-V expression B-CLL cells. This increment was in parellel to the increased expression of CD95 and annexin V in CD8+ T cells. The effectiveness of IFN-$alpha$ in CLL may be due to its capability of increasing apoptosis in T cells.

Özet

Kronik lenfositik lösemi (KLL)'de Interferon-$alpha$ (IFN-$alpha$), invivo etkin olmasına karşın, in vitro B KLL hücrelerini apopitozdan korumaktadır. Çalışmamızda B KLL'de IFN-$alpha$' nin in vitro etkinliği araştırıldı, iki KLL'li hastadan ve sağlikli kontrollerden elde edilen mononükleer hücrelerden CD4 ve CD8 pozitif hücre seleksiyonu yapıldı. B KLL hücreleri, IFN-$alpha$ içeren ve içermeyen ortamda, 1) tek başına, 2) otolog veya allojenik CD4+ ve CD8+ T hücreleri ile transwell sistemde, ve 3) otolog CD4+ ve CD8+ T hücreleri ile direkt kontakt olacak sekilde kokültüre edildi. Bazal ve 72 saat kültür sonrası fas (CD95), CD40 ve anneksin-V ekspresyonlan flow sitometrik yöntemle çalışıldı. Her iki hastada da bazal ve kültür sonrası tüm B KLL hücrelerinde fas ekspresyonu düşük bulundu. B KLL hücrelerinde kültür sonrası CD40 ekspresyonlan tüm ortamlarda belirgin düşme gösterdi. KLL B hücrelerinin T hücreleri ile direkt kontakt durumunda Annneksin V ekspresyonunda azalma, buna karsin bu ortamlara IFN-$alpha$ eklenmesi ile Anneksin V ekspresyonunda artış gözlendi. Bu artışın özellikle CD8+ T hücrelerinde artmiş CD95 ve Anneksin V ekspresyonu ile birlikte olduğu görüldü. Bulgularımız IFN-$alpha$'nm, B KLL'deki etki mekanizmasının T hücrelerindeki apopitozu arttırmasına bağlı olabileceğini düşündürmektedir.