Multipl Skleroz Hastalarında Periferik Kan B Lenfosit Alt Gruplarının Akım Sitometrisi ile Değerlendirilmesi

Flow Cytometry Analysis of Peripheral Blood B Cell Distribution of Patients with Multiple Sclerosis

Canan ULUSOY, Vuslat YILMAZ, Suzan Adın ÇINAR, Recai TÜRKOĞLU, Deniz Ak TURA, Duygu Özkan YAŞARGÜN

Abstract

Objective: Multiple sclerosis (MS) is a central nervous system (CNS) disease characterized by autoimmune inflammation and neurodegeneration. Damage to the CNS is thought to be mediated predominantly by activated pro-inflammatory T cells and antibody secreting B cells. Strong evidence of B cell functions in MS pathogenesis has come from trials of B cell- depleting treatment. In this study, the peripheral blood frequencies of B cell subsets were measured using flow cytometry in patients to determine the disease-specific B cell differences that might be associated with the evolution to progressive forms of MS.Materials and Methods: Peripheral blood mononuclear cells were separated from patients and healthy controls [relapsing-remitting MS (RRMS) and secondary progressive MS (SPMS)]. Cells were stained with anti-human monoclonal antibodies (CD19-APC, CD27-FITC, IgD-APC/Cy7, CD138-PE, CD24-PerCP and CD38-Alexa fluor 700), and analyzed using flow cytometry.Results: There were no significant differences between the MS group and healthy controls by means of peripheral blood frequencies of B cells, immature, naïve, classic memory, plasma, plasmablasts, and regulatory B cells. Only higher naïve B cell frequency tendency was determined in patients with RRMS as compared with patients with SPMS and healthy controls.Conclusion: Peripheral blood B cell subset measurements are not likely to be used as a biomarker for prediction of disease progression. Although B cells have a well-known pathogenic significance, B cell population alterations do not occur during the progression of the disease

Özet

Amaç: Multipl skleroz (MS), bir merkezi sinir sistemi hastalığıdır ve otoimmün inflamasyon ve nörodejenerasyon ile karakterizedir. Hastalıkta aktif olan enflamasyon ve proinflamatuar T hücresi dışında antikor yapan B hücrelerinin de rolü büyüktür. Periferik B hücrelerinin MS hastalığındaki rolü, B hücrelerinin deplesyonu ile elde edilen bulgulara dayanmaktadır. Çalışmamızda periferik kandaki B hücre alt tiplerinin akım sitometrisi ile belirlenmesi ve hastalık alt gruplarındaki olası farklarının belirlenmesi hedeflendi.Gereç ve Yöntem: MS hasta grubu [relapsing-remitting MS (RRMS) ve sekonder progresif MS (SPMS)] ve sağlıklı donörlerden periferik kan mononükleer hücreleri izole edildi. Bu hücreler, B hücresine spesifik monoklonal antikorlar ile (CD19-APC, CD27-FITC, IgD-APC/Cy7, CD138-PE, CD24-PerCP ve CD38Alexa fluor 700) işaretlendi ve akım sitometrisi ile değerlendirildi.Bulgular: MS grubu ile sağlıklı donörler arasında B hücre, immatür, naif, klasik bellek, plazma, plazmablast ve düzenleyici B hücreleri dağılımları faklı değildi. Yalnızca naif B hücre frekansı RRMS hastalarında SPMS grubu ile kıyaslandığında görece yüksekti.Sonuç: Periferik kan B hücre alt tipleri, hastalık ve hastalık alt grupları arasında farklı olmaması sebebiyle biyo-belirteç olarak kullanılması düşünülemez. B hücrelerinin MS hastalığındaki patojenik önemi iyi bilinmekle beraber çalışmamız B hücresi popülasyon değişikliklerinin hastalığın progresyonu sırasında gerçekleşmediğini göstermektedir