Characterization of toxoplasma gondii proteins from various strains

Abstract

Objective: Toxoplasma gondii the causative agent of toxoplasmosis, is a worldwide intracellular protozoan parasite that infects all warm blooded animals including humans. It can be devastating to immunocompromised humans and congenital transmission may result in severe clinical spectrum. It causes economic losses due to abortus in animals. Toxoplasmosis diagnosis depends on direct and indirect methods. Besides the Sabin-Feldman test, which is accepted to be the reference test, serologic tests such as ELISA and immunofluorescence antibody tests are means of indirect diagnosis. As detected antibodies in serologic tests are correlated with antigens that cause their synthesis, it is important to know different proteins of different strains. In this study RH, Ankara and TS-4 strains were used and differences between their proteins were examined. Methods: RH and Ankara strains were inoculated into the peritoneal cavity of mice. TS- 4 strain was produced in Vero cell culture. Tachyzoites collected by peritoneal wash were lysed and lyophilised. This was run on SDS-PAGE gel and protein bands were compared with a standard protein ladder after staining with polychromatic silver stain.Results: It was observed that, while Ankara and RH strains had dense bands between 60-70 kDa and at 15 kDa, the most prominent bands of TS-4 strain were 60 ve 115 kDa bands.Conclusion: RH and Ankara strains have the same protein bands while TS-4 strain has different and fewer protein bands than the others. (Turkiye Parazitol Derg 2011; 35: 133-6)

Özet

Amaç: Toxoplasma gondii dünyada yaygın olarak görülen ve toksoplazmoza yol açan protozoon bir parazittir. Zorunlu hücre içi yerleşim göstermekte ve insanlar dahil tüm sıcak kanlıları enfekte etmektedir. Özellikle immunkompromize olanlarda ve konjenital bulaş sonucunda ciddi klinik tablolara yol açabilmektedir. Hayvanlarda meydana getirdiği düşüklerle de hayvancılığın yaygın olduğu ülkelerde ekonomik kayıplara yol açmaktadır. Tanısı direkt veya dolaylı olarak yapılabilmektedir. Dolaylı tanıda, referans test olan Sabin-Feldman boya testi, ELISA ve immun floresan antikor testi (IFA) gibi serolojik testlerden faydalanılmaktadır. Serolojik testlerde saptanan antikorlar, sentezlenmelerine yol açan antijen yapısıyla ilişkilidir, bu yüzden farklı suşlardaki protein yapılarının incelenmesi önem taşımaktadır. Bu çalışmada T. gondii'nin RH, Ankara ve TS-4 suşları kullanılmış ve protein yapılarındaki farklılıklar incelenmiştir. Yöntemler: Virulan RH ve Ankara suşları fare peritonuna inoküle edilerek, TS-4 suşu ise Vero hücre kültüründe üretilmiştir. İnokülasyondan üç gün sonra, takizoitler periton yıkanarak toplanmış ve parçalanmıştır. Lizatlar yoğunlaştırmak amacıyla liyofilize edildikten sonra protein içerikleri saptanmıştır. Suşların protein yapıları SDS-PAGE ile ayrılmıştır. Yürütülen lizatlar polikromatik gümüş boyası ile boyanmış ve ortaya çıkan bantlar moleküler ağırlık standardı ile karşılaştırılmıştır.Bulgular: Karşılaştırma sonucunda, Ankara ve RH suşunda 60-70 kDa arasında ve 15 kDa seviyesinde yoğunlaşma gözlenirken, TS-4 suşunda 60 ve 115 kDa ağırlığında olanlar en belirgindi.Sonuç: RH ve Ankara suşlarının aynı protein bantlarını içerdiği, TS-4 suşunun daha farklı ve diğer iki virulan suşa oranla daha az protein bantına sahip olduğu anlaşılmıştır. (Turkiye Parazitol Derg 2011; 35: 133-6)