Karaciğer Kelebeği Fasciola hepatica'dan Adenozin trifosfataz (ATPaz)'ın Kısmi Saflaştırılması ve Özellikleri

Partial Purification and Properties of Adenosine Triphosphatase (ATPase) from Liver Fluke Fasciola hepatica

Abstract

Objective: The adenosine triphosphatase (ATP phosphohydrolase, EC 3.6.1.3.;ATPase) is a membrane -bound enzyme which transport protons across the plasma membrane using ATP as an energy source.Methods: The adenosine triphosphatase (ATPase ; EC: 3.6.1.3) was extracted from membrane preparations of adult Fasciola hepatica by chloroform treatment and purified by means of ammonium sulphate fractionation, gel filtration on sephadex G-200 and DEAE- Cellulose chromatography.Results: The molecular weight was calculated to be 305.000 dalton by gel filtration. Kinetic experiments demonstrated a biphasic linear lineweaver - burk relationship (km=0.142 and 1.66 mM) thus revealing the existence of two substrate binding enzyme sites.Conclusion: In our study revealed that partial inhibition of Mg2+ dependent purified enzyme by oligomycin suggest the absence of mitochondrial ATPase in F. hepatica

Özet

Amaç: Adenozin trifosfataz (ATP fosfohidrolaz, EC 3.6.1.3, ATPaz) enerji kaynağı olarak ATP kullanarak plazma membranında proton taşıyan bir membran-bağlı enzimdir.Yöntemler: Adenozin trifosfataz (ATPaz; EC: 3.6.1.3) yetişkin Fasciola hepatica'nın membran preparatlarından kloroform ile muamele edilerek ekstrakte edildi ve amonyum sülfat fraksiyonasyonu, sefadeks G-200 jel filtrasyonu ve DEAE-Selüloz kromatografisi vasıtasıyla saflaştırıldı.Bulgular: Moleküler ağırlığı, jel filtrasyon ile 305000 dalton olarak hesaplandı. Kinetik deneyler, iki fazlı, doğrusal bir Lineweaver-Burk ilişkisini ortaya koydu (km=0.142 ve 1.66 mM), böylece subtrat bağlayan iki enzim bölgesinin varlığı gösterildi.Sonuç: Çalışmamız ortaya koymuştur ki; oligomisin tarafından Mg2+ bağımlı saflaştırılmış enzimin kısmi inhibisyonu F. hepatica'da mitokondriyal ATPaz bulunmadığını düşündürmektedir