The Importance of Checking Leishmania Promastigotes Viability in the Proteomics Analysis of Secretions

Sekresyonların Proteomiks Analizinde Leishmania Promastigotların Canlılıklarının Kontrol Edilmesinin Önemi

Abstract

Objective: The aim of the present study was to compare the efficacy of checking the viability of Leishmania promastigote by flow cytometry usingpropidium iodide (PI) and microscopic method using trypan blue (TB) before proteomics analysis of the secretions.Methods: The promastigotes (6×109) of Leishmania infantum in the exponential growth phase were transferred to serum-free media. Then, the viabilityof promastigotes was checked and compared with flow cytometry and microscopic method at 0, 2, 3, 4, 5, and 72 h.Results: Flow cytometry did not show many dead cells at 0 to 4 h, and the viability was approximately 98%. The percentage of the dead promastigotesincreased to 8% at 5 h and 17% at 72 h. Meanwhile, the microscopic method using TB did not show any dead cell after 4 and 72 h, and the viabilitywas 100%.Conclusion: The present study confirms the importance of flow cytometry using PI in checking the viability of Leishmania promastigotes, especiallybefore the proteomics analysis of the secretions. It also shows that flow cytometry using PI is more sensitive than microscopic method using TB.

Özet

Amaç: Bu çalışmanın amacı, sekresyonların proteomik analizinden önce, Leishmania promastigotunun canlılığının tripan mavisi (TB) kullanılan mikroskopik yöntem ve propidum iyodid (PI) kullanılan akış sitometrisi ile kontrol edilmesinin etkinliğini karşılaştırmaktır. Yöntemler: Üstel büyüme fazında Leishmania infantum promastigotları (6×109) serumsuz ortama aktarıldı. Daha sonra promastigotların canlılığı 0, 2, 3, 4, 5 ve 72nci saatlerde akış sitometrisi ve mikroskopik yöntemle kontrol edildi ve karşılaştırıldı. Bulgular: Akış sitometrisi 0 ila 4 saat arasında çok ölü hücre göstermedi ve canlılık yaklaşık % 98 idi. Ölü promastigotların yüzdesi 5 saatte %8’e ve 72 saatte %17’ye yükseldi. Diğer yandan, TB kullanan mikroskobik yöntemde 4 ve 72 saat sonra herhangi bir ölü hücre gözlenmedi ve canlılık % 100 idi. Sonuç: Bu çalışma, özellikle sekresyonların proteomik analizinden önce, Leishmania promastigotlarının canlılığının kontrol edilmesinde PI kullanılarak uygulanan akış sitometrisinin önemini doğrulamaktadır. Ayrıca PI kullanılan akış sitometrisinin, TB kullanılan mikroskopik yöntemden daha duyarlı olduğunu da göstermektedir.