Alternative Staining Method for Four Parasites that are Difficult to Identify through Direct Inspection

Direkt Bakıda Tanımlama Zorluğu Yaşanılan Dört Parazit İçin Alternatif Bir Yaklaşım

Abstract

Objective: The aim of the present study was to identify Blastocystis spp. (particularly the granular form), Dientamoeba fragilis, and Entamoeba histolytica/ dispar trophozoites, which are difficult to identify using wet mount, as well as Giardia intestinalis cysts, which are difficult to identify by unexperienced researchers, in fresh fecal samples within 5 min using a different fixative employing trichrome staining. Methods: The slides were fixed by fixatives based ethyl alcohol, formalin, acetic acid, and distilled water including four different mordants (divalent or polyvalent metals that form coordination complex with some dyes) consisted of zinc sulfate hydrate, copper sulfate hydrate, aluminum sulfate hydrate, and ferric sulfate hydrate using a modification of Gomori’s trichrome staining. Samples fixed by Schaudinn fixative including mercury chloride were stained using Wheatley modification of Gomori’s trichrome staining as gold standard for control and comparison. Results: Regarding D. fragilis and E. histolytica/dispar trophozoites, similar results were obtained among the slides stained by classical fixation/ staining method and those stained by the alternative method. However, regarding Blastocystis spp. and Giardia intestinalis cysts, classical fixation/ staining method was relatively superior to the alternative method. Conclusion: Although the alternative method is slightly inferior to the classical fixation/staining method, it seems to be a good option with respect to the process time.

Özet

Amaç: Taze dışkı örneklerinde, ıslak preparat (nativ-lugol) incelemesinde tanımlamada zorlandığımız Blastocystis spp. (özellikle granüler form), Dientamoebafragilis, Entamoeba histolytica/dispar trofozoitleri ile deneyimsiz araştırmacıların tereddüt yaşayabileceği Giardia intestinalis kistleri için farklıbir fiksatif kullanılarak Trikrom boyası ile yaklaşık beş dakika içinde tanımlanması amaçlanmıştır.Yöntemler: Çinko sülfat hidrat, bakır sülfat hidrat, alüminyum sülfat hidrat ve ferrik sülfat hidrat gibi dört farklı mordan [bazı boyalar ile koordinasyonkompleksleri oluşturan polivalens (en az +2 değerlikli) metaller] kullanılarak hazırlanmış etil alkol, formalin, asetik asit ve distile su bazlı fiksatifler iletespit edilmiş preparatlar Gomori’nin trikrom boyasının modifiye edilmiş şekli ile boyanmıştır. Kontrol ve kıyaslama amacıyla altın standart olarak; cıvaklorür içeren Schaudinn fiksatifi ile fikse edilen örnekler Gomori’nin trikrom boyasının Wheatley modifikasyonu ile boyanmıştır.Bulgular: D. fragilis ve Entamoeba histolytica/dispar trofozoitleri ele alındığında; alternatif yöntem tatbik edilen dışkı örnekleri ile klasik fiksasyon/boyama yöntemi ile boyanmış preparatlar arasında değerlendirme kriterleri açısından hemen hemen benzer sonuçlar alınmıştır. Blastocystis spp. veGiardia intestinalis kistleri ele alındığında ise, klasik fiksasyon/boyama yönteminin alternatif yönteme nazaran biraz daha üstün olduğu gözlenmiştir.Sonuç: Alternatif yöntem klasik yönteme göre bir miktar yetersiz kalmasına rağmen sürecin kısalığı göz önüne alındığında iyi bir seçenek gibi gözükmektedir.