[Androctonus crassicauda (Türk siyah akrebi) akrep venomunda jelatinolitik proteazların belirlenmesi için bir ön çalışma

A preliminary study for the detection of gelatinolytic proteases from the scorpion androctonus crassicauda (Turkish black scorpion) venom

Abstract

Objectives: Despite the long history on proteolytic activity studies, no study hasbeen reported about the presence of proteases from the Turkish scorpion A. crassicauda venom which is among the most toxic species in the world. The presentwork is a preliminary study indicating the presence of gelatinolytic proteases in theA. crassicauda crude venom which almost nothing is known about its components.Methods: Protein contents of the venom were analyzed by electrophoresis. Further,the venom fractions were separated by liquid chromatography. Proteolytic activities of crude venom and each fraction were determined by zymogram assay.Results: Two proteins with gelatinolytic activity were detected between 36-45 kDaand 97-116 kDa in the soluble venom at a range of pH 4.0 to 8.0. Proteolytic bandsfrom the fractions obtained chromatographically were detected as three bands between 14.2 and 20 kDa; one band between 20 and 24 kDa; three bands between 24and 29 kDa; two bands between 97 and 116 kDa at pH 7.Conclusion: Here, first electrophoretic separation of the venom from A. crassicauda where the proteolytic activity against gelatin is reported. These enzymes mayprove to be a useful tool for the study of toxin processing and understanding themechanism of venom activation.

Özet

Amaç: Proteolitik aktivite çalışmalarının uzun geçmişine karşılık, dünyanın entoksik türleri arasında olan Türk akrebi Androctonus crassicauda venomununiçerdiği proteazların varlığı üzerine bir çalışma bildirilmemiştir. Bu çalışma, venom bileşenleri hakkında literatürlerde yok denecek kadar az bilgi olan A. crassicauda ham venomunda jelatinolitik proteazların bulunduğunu gösteren bir başlangıççalışmasıdır.Metot: Venomun protein bileşenleri elektroforez ile analiz edilmiştir. Ayrıca, venom fraksiyonları sıvı kromatografide ayrılmıştır. Ham venomun ve her bir fraksiyonun proteolitik aktiviteleri zimogram çalışması ile belirlenmiştir. Bulgular: pH 4.0 ile pH 8.0 arasında çözülebilir A. crassicauda venomunda, 36-45kDa ve 97-116 kDa arasında olanjelatinolitik aktiviteli iki protein belirlenmiştir.pH 7’de, kromatografik olarak elde edilen fraksiyonlardan, proteolitik bandlar 14.2ve 20 kDa arasında üç band; 20 ve 24 kDa arasında bir band; 24 ve 29 kDa arasındaüç band ve 97 ve 116 kDa arasında iki band olarak tesbit edilmiştir.Sonuç: Bu çalışma ile jelatine karşı proteolitik aktivitenin olduğu A. crassicaudavenomundan ilk elektoforetik ayırım bildirilmektedir. Bu enzimlerin toksin ile ilgili süreçlerin çalışılması ve venom aktivasyon mekanizmasının anlaşılması içinyararlı araçlar olabileceğini göstermektedir.