Isolation and Characterization of Amylase Producing Yeasts and Improvement of Amylase Production

Amilaz Üreticisi Mayaların İzolasyonu ve Karakterizasyonu ve Amilaz Üretiminin Arttırılması

Abstract

Objectives: Because most of the yeasts from nature are not harmful as compared to bacteria, interest in yeasts with potential use in biotechnological processes has increased in recent years. Therefore, in this study, we aimed to isolate and characterize amylase producing yeasts and investigate the effects of different parameters on the production of amylase. Methods: Five different sources were used for the isolation of the yeasts. For screening of the amylase production, the isolates were incubated in Amylase Activity Medium at 30°C for 3 days. The amylase activity was determined by dinitrosalicylic acid method. Molecular characterization of the amylase producing yeasts was performed with restriction fragment length polymorphism (RFLP) of the 5.8S and 18S rRNA regions, and sequence analysis of D1/D2 domain of the 26S rRNA region.Results: In total, twenty five yeast isolates were obtained from five different sources. Following the incubation in medium containing starch for the screening of amylase production, it was found that 12 yeast isolates produce amylase, and among the isolates, three of themshowed the highest amylase activity. The isolates having the highest activity were identified as S. fibuligera. The strains showed the highest amylase production at 30°C and pH 5.5. Among additives, sodium chloride, polyethylene glycol, sodium dodecyl sulfate, Triton X-100 and Tween 80 stimulated the production of amylase. Other additives showed negative influence on the production of enzyme.Conclusion: The study revealed that favorable fermentation conditions and the selection of suitable growth parameters played key roles in the production of amylase by S. fibuligera

Özet

Amaç: Doğadan elde edilen pek çok mayanın bakterilere nazaran daha zararsız olmasından dolayı, son yıllarda biyoteknolojik işlemlerde kullanılma potansiyeli olan mayalara karşı ilgi artmıştır. Bu nedenle çalışmada, amilaz üretici mayaların izolasyonu, karakterizasyonu ve amilaz enzimi üretimi üzerine çeşitli parametrelerin etkisinin araştırılması amaçlanmıştır.Gereçler ve Yöntemler: Mayaların izolasyonu için 5 farklı kaynak kullanılmıştır. Amilaz üretiminin taranması için izolatlar, Amilaz Aktivite Ortamında 30°C'de 3 gün inkübe edilmiştir. Amilaz aktivitesi, dinitrosalisilik asit yöntemine göre saptanmıştır. Amilaz üretici maya izolatlarının moleküler karakterizasyonu, 5.8S ve 18S rRNA bölgelerinin restriksiyon fragment uzunluk polimorfizmi (RFLP) ve 26 rDNA bölgesi D1/D2 domaini sekans analizi ile gerçekleştirilmiştir.Bulgular: 5 farklı kaynaktan toplamda 25 adet maya elde edilmiştir. Amilaz üretiminin taranması için nişasta içeren ortamda inkübasyondan sonra, 12 maya izolatı amilaz üretmiş ve bunlardan 3 tanesi en yüksek amilaz aktivitesi göstermiştir. En yüksek aktivite gösteren izolatlar , S. fibuligera olarak tanılanmıştır. Strainler en yüksek amilaz üretimini 30°C ve pH 5.5'de göstermiştir. Katkı maddelerinden sodyum klorür, polietilen glikol, sodyum dodesil sülfat, Triton X-100 ve Tween 80 amilaz üretimini artırmıştır. Diğerleri, enzim üretimi üzerine negatif etki göstermiştir.Sonuç: Çalışma, uygun fermentasyon koşullarının ve uygun büyüme parametrelerinin seçiminin, S. fibuligera tarafından amilaz üretiminde anahtar roller oynadığını göstermiştir