Farklı besiyerlerinin dendritik hücre izolasyon ve farklılaşmasına etkisi

Effect of different culture media on isolation and differentiation of dendritic cells

Semra KOÇTÜRK, Ayşe Mine YILMAZ, Gülşah GEDİK, Yavuz TAGA, A. Süha YALÇIN, Ergül Mutlu ALTUNDAĞ

Abstract

objective: dendritic cells (dCs) are members of the mammalian immune system and are considered to be the most powerful antigen presenting cells. They are responsible for the induction of T-cells or T-cell dependent immunity and tolerance. in this study we have investigated the effect of different serum supplements on generation and yield of mature dendritic cells isolated from peripheral blood mononuclear cells.Methods: Three different serum supplements (10% Fetal Bovine Serum, 1% Human Serum Albumin and 1% autologous serum) were compared with serum-free media to identify the role and importance of serum supplements on dC cultivation. Effect of different media on maturation signs (Cd40, Cd80, Cd86, Cd209a) and cytokine release (TNF-α, iL-10, iL-12, iL-6) was examined.Results: dCs generated in serum-free media was similar to those of cells in medium with autologous serum. Few dendritic-like cells were observed in fetal bovine serum and human serum albumin. The effect of different media on maturation of dCs was compared phenotypically and increased expression of Cd80, Cd86 and Cd209a identified maturation and yield of dCs.Conclusion: our results suggest that serum free media can be used to overcome potential drawbacks associated with different serum containing supplements.

Özet

Amaç: dendritik hücreler (dC), memeli immun sistemindeki en güçlü antijen sunan hücreler olarak kabul edilir. Bu hücreler, T-hücrelerin uyarılması ile T-hücre bağımlı bağışıklıktan sorumludur. Bu çalışmada farklı serumların periferik kandan izole edilen mononükler hücrelerin olgun dentritik hücrelere farklılaşması üzerine etkileri araştırılmıştır.Metod: dC kültürlerindeki serum desteklerinin rolünü tanımlamak üzere, Fetal Sığır Serumu, İnsan Serum Albümini ve otolog serum içeren besiyerlerinin etkisi serumsuz ortam ile karşılaştırılmıştır. olgunlaşma işaretleri (Cd40, Cd80, Cd86, Cd209a) ve sitokin salınımları (TNF-?, iL-10, iL-12, iL-6) açısından incelenmiştir.Bulgular: Serumsuz ortamda farklılaştırılan hücreler ile otolog serum içeren hücrelerin benzer özellikte olduğu buna karşılık fetal sığır serumu ile insan serum albümini içeren besiyerlerinin az sayıda dendritik hücre oluşturdukları gözlenmiştir. Farklı ortamların dendritik hücrelerdeki yüzey belirteçlerinin etkisine bakıldığında Cd80, Cd86 ve Cd209a artışı tanımlandı.Sonuç: dC üretiminde farklı faktörlerin hesaba katılması gerektiği ve serumsuz ortamların daha başarılı sonuçlar verdiği düşünülmektedir