İnsan kanser hücre hatlarında resveratrol sitotoksisitesinin XTT testi ve xCELLigence sistemi ile karşılaştırmalı analizi

Comparative analysis of XTT assay and xCELLigence system by measuring cytotoxicity of resveratrol in human cancer cell lines

Abstract

Objective: In vitro preliminary oncological and translational studies are mainly based on evaluating the cytotoxic effects of a specific compound on cultured cells. Resveratrol is a commercially available compound which is originally isolated from the roots of white hellebore and later from Polygonum cuspidatum. The objective of the study was to compare cytotoxicity data of Resveratrol from XTT end point assay with a real-time cell based xCELLigence system in terms of accuracy, sensitivity, speed and reproducibility in a panel of human cancer cell lines.Methods: XTT end point assay and real-time cell based xCELLigence system were used to evaluate cytotoxicity. Cytotoxicity results were verified by monitoring cells under phase-contrast microscope which were treated with IC50 values of resveratrol.Results: Resveratrol decreased cell viability in a timeand concentration-dependent manner in all cancer cell lines when tested by both the XTT assay and xCELLigence system. Standard deviations of the xCELLigence data were found to be lower than the data from XTT assay.Conclusion: The data from this study strongly imply that xCELLigence system has higher precision, more enlight-ening and more reproducible than XTT end point assay.

Özet

Amaç:Invitroprelimineronkolojikvetranslasyonelçalışmalar, spesifik bir ilacın sitotoksik etkilerinin hücre kültürleri üzerinde aydınlatılmasına dayanır. Resveratrol ticari olarak satışta olan beyaz zambak bitkisinin kökler-inden ve Polygonum cuspidatum bitkisinden izole edilmiş birbileşiktir.Buçalışmadaresveratrolünsitotoksiketkilerinin, hedeflenen zaman noktalarında ölçüm yapan XTT testi ve sürekli ölçüm yapan xCELLigence sistemi kullanılarak tutarlılık, hassasiyet, hız ve tekrarlanabilirlik yönünden karşılaştırılması amaçlanmıştır.Yöntem:Sitotoksisiteninbelirlenmesinde,hedeflenenzaman noktalarında ölçüm yapmayı sağlayan XTT testi vesürekliveritoplayarakölçümyapanxCELLigencesistemi kullanıldı. Resveratrolün IC50 konsantrasyonu ile muamele edilen hücreler faz kontrast mikroskobunda görüntülenerek sitotoksisite verileri doğrulandı.Bulgular: XTT yöntemi ve xCELLigence sistemi ile test edilenResveratrolün,tümkanserhücrehatlarındacanlılığı konsantrasyona ve zamana bağlı olarak azalttığı belirlendi. xCELLigence sisteminden elde edilen verilere ait standart sapma değerlerinin XTT yöntemine göre elde edilenlerden daha düşük olduğu belirlendi. Sonuç: Bu çalışmada, XTT testi ile karşılaştırıldığında, xCELLigence sisteminin daha yüksek duyarlılığa sahip olduğunu ve tekrarlanabilir veriler elde etmede daha ver-imli olduğunu belirten veriler elde edilmiştir. Hücre kül-türlerinin sürekli izlenmesinin, hücre canlılığının erken dönemde oluşabilecek değişikliklerin belirlenmesine ola-nak sağlayacağını ve hücre ölümünün başladığı zamanı doğru tahmin etmede yararlı olacağını belirten veriler elde edilmiştir.