Effects of Shiranuhi flower extracts and fractions on lipopolysaccharide-induced inflammatory responses in murine RAW 264.7 cells

Nam Ho LEE, Chang Gu HYUN, Min-Jin KIM, Sang Suk KIM, Ji Hye KO, Young Il MOON, Kyung Jin PARK, Hyun Joo AN, Young Hun CHOI

Abstract

Objective: In this study, we evaluated the anti-inflammatoryeffect of Shiranuhi flower in RAW 264.7 cells.Methods: The effects of the extracts and solvent fractionson cell viability and LPS-induced inflammatory responseswere investigated in RAW 264.7 cells.Results: The results showed that the ethyl acetate fraction(HEF) significantly decreased NO production in RAW 264.7cells; however, cell viability was not affected. In addition,ELISA assay revealed that HEF significantly inhibitedthe productions of PGE2, TNF-α, and IL-6. As well, usingWestern blot analysis, it was observed that HEF significantlyreduced the expression levels of iNOS and COX-2in a dose dependent manner. Furthermore, we detecteda reduced phosphorylation of mitogen-activated proteinkinases such as p38, JNK, and ERK1/2. This indicates thatHEF regulates LPS-induced inflammatory responses, atleast in part, via suppressing the MAPK signaling pathway.Correlation analysis also showed that anti-inflammatoryactivities were highly correlated to antioxidant activitiesin this study. Characterization of the Shiranuhi flowers forflavonoid contents using HPLC showed varied quantity ofnarirutin and hesperidin.Conclusion: Overall, the results demonstrate that HEFmay be a potential anti-inflammatory agent. In addition,our findings contribute to understanding the molecularmechanism underlying the anti-inflammatory effect ofShiranuhi flower.

Özet

Amaç: Bu çalışmada, RAW 264.7 hücrelerinde Shiranuhi çiçeğinin anti-inflamatuar etkisini değerlendirdik. Yöntem: Ekstraktların ve çözücü fraksiyonlarının hücre sağlığı ve LPS ile uyarılan inflamatuvar tepkileri üzerindeki etkileri, RAW 264.7 hücrelerinde araştırılmıştır. Bulgular: Sonuçlar etil asetat fraksiyonunun (HEF) RAW 264.7 hücrelerinde NO üretimini önemli ölçüde azalttığını gösterdi; ancak hücre canlılığı etkilenmemiştir. Buna ek olarak, ELISA tahlili, HEF’in PGE2, TNF-α ve IL-6 üretimlerini önemli ölçüde inhibe ettiğini ortaya koymuştur. Sonuçlar etil asetat fraksiyonunun (HEF) RAW 264.7 hücrelerinde NO üretimini önemli ölçüde azalttığını gösterdi; Ancak hücre canlılığı etkilenmemiştir. Buna ek olarak, ELISA tahlili, HEF’in PGE2, TNF-α ve IL-6 üretimlerini önemli ölçüde inhibe ettiğini ortaya koymuştur. Bunun yanı sıra, Western blot analizi kullanılarak, Hef’in doza bağımlı olarak iNOS ve COX-2 ekspresyonu anlamlı bir şekilde azalttığı gözlenmiştir. Dahası, p38, JNK ve ERK1/2 gibi mitojenle aktive olan protein kinazların fosforilasyonunun azaldığını tespit edilmiştir. Bu bulgular, HEF’in, en azından kısmen MAPK sinyal yolunu baskılayarak, LPS ile uyarılan inflamatuvar tepkileri regüle ettiğini gösterir. Ayrıca bu çalışmada yapılan korelasyon analizi, anti-inflamatuvar aktivitelerin antioksidan aktivitelerle yüksek oranda korele olduğunu göstermiştir. Shiranuhi çiçeğinin flavonoid içeriği HPLC kullanarak karakterize edildiğinde çeşitli miktarlarda narirütin ve hesperidin bulunmuştur. Sonuç: Genel olarak, sonuçlar HEF’in potansiyel bir anti-inflamatuar ajan olabileceğini göstermektedir. Buna ek olarak, bulgularımız Shiranuhi çiçeğinin anti-inflamatuar etkisinin altında yatan moleküler mekanizmanın anlaşılmasına katkıda bulunmaktadır.