Covalent immobilization of an alkaline protease from Bacillus licheniformis

Abstract

Objective: Since the soluble enzymes can not be usedin repeated reactions and are not stable in operationalconditions and not suitable for continuous processes,this study aimed the covalent immobilization of Bacilluslicheniformis protease (BLP) onto Eupergit CM.Methods: Optimum conditions for immobilization weredetermined by changing the conditions individually.The proteins and L-tyrosine were determined by UV/VISspectrophotometer.Results: The immobilization resulted in 100% immobilizationand 107.7% activity yields. The optimum pH (7–8) andthe optimum temperature (70°C) have not changed afterimmobilization. The Km values for free and immobilizedenzyme were 26.53 and 37.59 g/L, while the Vmax valueswere 2.84 and 3.31 g L-Tyrosine/L · min, respectively. Theimmobilized enzyme has not lost its initial activity duringthe repeated 20 uses and 20 days of storage. The milk proteinswere hydrolyzed in 2 h by using immobilized enzyme.The pH of the milk dropped from 6.89 to 6.53, the color wasclearer but there was no change in the smell or the taste.Conclusion: Consequently, it can be said that the immobilizedBLP obtained can be used for industrial purposes.

Özet

Amaç: İmmobilize enzimler, tekrarlanan reaksiyonlarda kullanılamadığı ve kullanım şartlarında kararlı olmadığı ve endüstriyel sürekli süreçler için uygun olmadığından, bu çalışma, BLP’nin Eupergit CM’ye kovalent immobilizasyonunu amaçlamıştır. Yöntemler: İmmobilizasyon için optimum koşullar, şartlar ayrı ayrı değiştirilerek belirlendi. Proteinler ve L-tirozin, UV/VIS spektrofotometre ile tayin edildi. Bulgular: İmmobilizasyon % 100 immobilizasyon verimi ve % 107.7 aktivite verimi ile sonuçlandı. Optimum pH (7–8) ve optimum sıcaklık (70°C) immobilizasyon sonrasında değişmemiştir. Serbest ve immobilize enzim için Km değerleri sırasıyla 26.53 ve 37.59 g/L iken, Vmax değerleri sırasıyla 2.84 ve 3.31 g L-Tirozin/L · dk idi. İmmobilize enzim, tekrarlanan yirmi kullanım sırasında ve yirmi gün saklama süresinde başlangıç aktivitesini kaybetmedi. İmmobilize enzim kullanılarak süt proteinleri iki saat içinde tamamen hidrolize edildi. Sütün pH’sı 6.89’dan 6.53’e düşerken, renginde biraz açılma oldu fakat kokusunda ve tadında herhangi bir değişiklik olmadı. Sonuç: Sonuç olarak, elde edilen immobilize BLP’nin endüstriyel amaçlar için kullanılabileceği söylenebilir.