Effects of calcium hydroxide and N-acetylcysteine on MMP-2, MMP-9, TIMP-1 and TIMP-2 in LPS-stimulated macrophage cell lines

Kalsiyum hidroksit ve N-asetilsistein’ in LPS ile stimüle edilmiş makrofaj hücre hatlarındaki MMP-2, MMP-9, TIMP-1 ve TIMP-2 üzerine etkileri

Eda Ezgi ASLANTAŞ, Hatice Doğan BUZOĞLU, Deniz CEYHAN, Banu PEYNİRCİOĞLU, Yasemin AKSOY, Yeliz Zülfiye AKKAYA ULUM

Abstract

Aim: This study was evaluated the effects of N-acetylcysteine(NAC) and calcium hydroxide (Ca(OH)2) onthe expression levels of matrix metalloproteinase -2, -9(MMP-2, -9) and tissue inhibitor metalloproteinase -1,-2 (TIMP-1, -2) in lipopolysaccharide (LPS)-stimulatedhuman macrophages.Methods: Human monocyte precursor cells (THP-1) weredifferentiated into macrophage-adherent cells and werestimulated with LPS for 24 h. Then individually incubatedwith NAC or Ca(OH)2 for 24, 48 and 72 h. Following incubation,protein expression and mRNA levels of MMP-2, -9and TIMP-1, -2 were evaluated using enzyme-linked immunosorbentassay (ELISA) and quantitative real-time polymerasechain reaction (qRT-PCR). Data were statisticallyanalysed using two-way ANOVA, to followed by Bonferronitest at α = 0.05.Results: NAC significantly decreased mRNA expressionand protein levels of MMP-9, while Ca(OH)2 decreasedmRNA expression alone at 24 h. NAC and Ca(OH)2 decreasedmRNA expression of MMP-2 at 24 h, while NAC increasedthis expression at 48 h. Although NAC and Ca(OH)2decreased the mRNA expression of TIMP-1, -2 at 24 h, onlyNAC increased mRNA expression of TIMP-1 at 48 h.Conclusion: At the early stages of inflammation, NAC andCa(OH)2 have anti-inflammatory effects on macrophages.

Özet

Amaç: Bu çalışmanın amacı lipopolisakkaritle (LPS) stimule edilmiş insan makrofaj hücrelerinde N-asetilsistein (NAC) ve kalsiyum hidroksit’in (Ca(OH)2), matriks metalloproteinaz-2 ve -9 (MMP-2, -9) ve doku inhibitor metalloproteinaz-1 ve -2 (TIMP-1, -2) salınımı üzerine etkilerini belirlemektir. Yöntemler: İnsan monosit precursor hücreleri (THP-1) makrofaj adherent hücrelere dönüştürülmüştür. Makrofaj hücreleri 24 saat LPS ile stimule edilmiş ve NAC veya Ca(OH)2 ile 24, 48 ve 72 saat inkübe edilmişlerdir. İnkübasyonu takiben, MMP-2, -9 ve TIMP-1,-2 mRNA seviyeleri ve protein salınımı enzim ilintili immun test (ELISA) ve kantitatif eş zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (qRT-PCR) ile değerlendirilmiştir. Veriler istatistiksel olarak Bonferronni testini takiben (α = 0.05) iki yönlü varyans analizi (ANOVA) ile analiz edilmiştir.Bulgular: Ca(OH)2 24. saatte sadece MMP-9 mRNA salınımını azaltırken, NAC, hem MMP-9 protein hem de mRNA salınımını belirgin bir şekilde azaltmıştır ancak her iki materyal de 48.saatte MMP-9 protein ve mRNA salınımını arttırmıştır. Dahası NAC ve Ca(OH)2 MMP-2 mRNA salınımını 24. saatte azaltırken, NAC bu salınımı 48. saatte arttırmıştır. NAC and Ca(OH)2 TIMP-1 ve -2 mRNA salınımını 24. saatte azaltırken, sadece NAC, TIMP-1 mRNA salınımını 48. saatte arttırmıştır. Sonuç: Sonuçlarımız, inflamasyonun erken safhasında NAC and Ca(OH)2’ in makrofajlar üzerinde anti-inflamatuar etkilerinin olduğunu göstermiştir.