Targeting epidermal growth factor receptor pathway with irreversible tyrosine kinase inhibitor

Epidermal Büyüme Faktör yolağının dönüşümsüz tirozin kinaz inhibitörüyle hedeflenmesi

Abstract

Background: Malignant mesothelioma (MM) is an endemic disease around central Anatolia region in Turkey, where people are exposed to erionite- and asbestos-contaminated soil. Aberrant EGFR signalling has implicated in several cancers including MMs. Tyrosine kinase inhibitors are new treatment options harbouring deregulated signalling network components. In this study, we aimed to investigate anti-proliferative effect of CL-387,785 in MM cells. Materials and methods: Alteration of cell proliferation was evaluated with using MTS assay. Profile of EGFR, ERK, AKT, JNK and p38 proteins and ELK-1, JUN, STAT1, STAT3 and STAT5 genes were analysed by western blot and RT-PCR, respectively. Results: Viability of MM cells was inhibited in dose- and time-dependent manner. CL-387,785 affected MM cells earlier and at higher extent compared to the meso thelial cells. CL-387,785 treatments suppressed EGF-induced phosphorylation of EGFR, ERK, AKT, STAT3 and STAT5 but not SAPK/JNK and p38 in SPC212 cells. RT-PCR analysis showed that expression of p21 increased, while Cyclin D and c-jun expressions decreased in SPC212 cells. However, ELK-1, STAT3 and STAT5, expressions did not change.Conclusion: Our results propose that CL-387,785 could be an efficacious agent in the treatment of MMs with uncontrolled EGFR signalling.

Özet

Amaç: Malignant Mezotelyoma Türkiye’de insanların erionite ve asbestli topraklara maruz kalması neticesinde İç Anadolu Bölgesi civarında sıklıkla görülen endemik bir hastalıktır. Bozulmuş EGFR sinyalleri Malignant Mezotelyoma da dahil birçok kanserde görülmektedir. Tirozin kinaz inhibitörleri düzeni bozulan sinyal sistemleri için yeni bir tedavi seçeneği sunmaktadır. Bu çalışmada CL-387,785’in Malignant Mezotelyoma (MM) hücrelerindeki anti-proliferatif etkisinin belirlenmesi amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem: CL-387,785’nin hücre canlılığına etkisi, MTS assay ile analiz edilmiştir. EGFR, MAPK/ERK, SAPK/ JNK, p38MAPK, PI3K/AKT ve STAT yolaklarının protein analizleri Western Blot; ELK-1, JUN, STAT1, STAT3 ve STAT5 gen analizleri RT-PCR yöntemleriyle belirlenmiştir. Bulgular: CL-387,785 MM hücreler üzerinde konsantrasyona ve zamana bağımlı olarak anti-proliferatif etki göstermiştir. Kanser ve kontrol hücrelerine etkinliği karşılaştırıldığında, CL-387,785 SPC212 hücrelerini MeT-5a hücrelerine göre daha erken sürede ve daha düşük dozda baskılamıştır. CL-387,785, SPC212 hücrelerinde EGFR ile başlatılan EGFR, ERK, AKT, STAT3 ve STAT5 fosforilasyonlarını düşürürken; JNK ve p38 fosforilasyonları üzerinde etkin olmamıştır. Gen analizlerinde CL-387,785 uygulanan hücrelerde, CylinD ile c-jun mRNA seviyeleri azalırken, p21 seviyesinde artış gözlenmiştir. ELK-1, STAT3 ve STAT5 ekspresyonlarında ise anlamlı bir değişim belirlenmemiştir. Sonuç: Sonuçlarımız CL-387,785’in kontrolsüz EGFR sinyalleri taşıyan Malignant Mezotelyoma tedavisinde kullanılmaya aday bir ajan olabileceğini düşündürmektedir.