A practical ID-LC-MS/MS method for the most commonly analyzed steroid hormones in clinical laboratories

Klinik laboratuvarlarda en yaygın olarak analizi yapılan steroid hormonlar için pratik bir ID-LC-MS/MS metodu

Abstract

Background: Analysis of steroid hormones rapidly andreliably remains a challenge in clinical laboratories as thisplays an important role in evaluation of many endocrinedisorders. The aim of this study was to create a steroidprofiling panel by using a liquid chromatography tandemmass spectrometry (LC-MS/MS) method which was composed of the most commonly analyzed steroid hormonesin clinical laboratories.Materials and methods: Protein precipitation was performed for sample preparation. Ultra performance liquidchromatography (UPLC) system and an analytical columnwith C18 selectivity was chosen for chromatographic seperation. Atmospheric pressure chemical ionization (APCI)ion source was preferred for ionization, and tandem MSwith triple quadrupole was used. MS scan was performedusing the selected reaction monitoring mode in positivepolarity. During the method validation process, test performance was evaluated for each steroid hormone, and40 serum samples were used for method comparison withimmunoassays available in our core laboratory.Results: An isotope dilution (ID)-LC-MS/MS method wasdeveloped, in which 13 steroids can be analyzed in thesame run. Test performance was quite good for the 11 steroids (cortisol, DHEA, DHEAS, total testosterone, progesterone, androstenedione, 11-deoxycortisol, cortisone, corticosterone and dihydrotestosterone) while estradiol andaldosterone performance was suboptimal considering theprecision and trueness.Conclusion: This ID-LC-MS/MS method would be usefulin clinical laboratories, especially for the immunoassayshaving insufficient test performance and when checkingfor interferences in available immunoassays.

Özet

Amaç: Steroid hormonların hızlı ve güvenilir bir şekilde analiz edilmesi, birçok endokrin bozukluğun değerlendirilmesinde önemli bir rol oynadığı için, klinik laboratuvarlarda bir sorun olmaya devam etmektedir. Bu çalışmanın amacı, LC-MS/MS tekniğini kullanarak, klinik laboratuvarlarda en sık analiz edilen steroid hormonlardan oluşan bir steroid profil paneli oluşturmaktı. Materyal ve Metot: Örnek hazırlığı için protein çöktürmesi yapıldı. Kromatografik ayırma için UPLC sistemi ve C18 seçiciliği olan bir analitik kolon seçildi. İyonlaştırma için APCI iyon kaynağı tercih edildi ve üçlü kuadrupole sahip tandem MS kullanıldı. MS taraması, seçilmiş reaksiyon izleme modu kullanılarak, pozitif polaritede gerçekleştirildi. Metot validasyonu işlemi sırasında, her bir steroid hormonu için test performansı değerlendirildi ve merkez laboratuvarımızdaki mevcut immün-ölçümlerle metot karşılaştırması için 40 serum örneği kullanıldı. Bulgular: Aynı çalışma içerisinde 13 steroidin analiz edilebildiği bir ID-LC-MS/MS metodu geliştirildi. Test performansı, 11 steroid için (kortizol, DHEA, DHEAS, total testosteron, progesteron, androstenedion, 11-deoksikortizol, kortizon, kortikosteron ve dihidrotestosteron) oldukça iyiydi; ancak östradiol ve aldosteron performansı, kesinlik ve doğruluk göz önüne alındığında suboptimaldi. Sonuç: Bu ID-LC-MS/MS metodu; klinik laboratuvarlarda, özellikle yetersiz test performansına sahip olan immün-ölçümler için ve mevcut immün-ölçümlerdeki interferansları kontrol etmek için yararlı olacaktır.