Proteases from Calotropis gigantea stem, leaf and calli as milk coagulant source

Peynir Mayası kaynağı olarak Calotropis gigantea kök, yaprak ve calli’den elde edilen proteazlar

Abstract

Background: Universal demand for cheese keeps thesearch for appropriate enzymes from plants mimickinganimal rennet action in scientific focus.Objective: To associate distribution of milk clotting potentialand profile of whole/κ-casein hydrolysis by Calotropisgigantea stem, leaf and respective calli crude enzymes (CE).Materials and methods: Milk clotting activity and indexwere assayed for CE. Caseinolytic activity (CA) was evaluatedspectrophotometrically. 0.5 CA units of CE andEnzeco® were used for studying whole/κ-casein hydrolysispattern by Tricine SDS-PAGE. Inhibition studies wereperformed for enzyme characterisation.Results: Traditionally propagated (TP) stem and itscallus CE exhibited high specific milk clotting activity(1297.30 ± 0.2 U/mg of protein and 926.74 ± 44.13 U/mg ofprotein, respectively) and milk clotting index (103.562 ± 1.162and 79.365 ± 4.93, respectively). Comparison of whole caseinhydrolytic pattern by 0.5 CA units of CE revealed closerresemblance between leaf callus and Enzeco®. However,κ-casein specificity analysis revealed TP leaf to be closelymimicking the performance by Enzeco®.Conclusion: Study suggests CE from TP leaf to be a potentialvegetable coagulant to work as an effective and lowcostmilk clotting mediator in cheese industry.

Özet

Amaç: Bilimsel çalışmalar peynire olan evrensel talep nedeniyle bilimsel odakta hayvansal peynir mayasını taklit eden uygun enzimleri bitkilerden aramaya odaklanmıştır. Bu çalışmanın amacı, C. gigantea kök, yaprak ve ilgili kültür edilmiş ham enzimler (CE) ile süt pıhtılaşma potansiyelinin dağılımını ve bütün/k-kazein hidrolizinin profilini ilişkilendirmektir. Gereç ve yöntemler: Süt pıhtılaşma aktivitesi ve indeksi CE için denendi. Kazeinolitik aktivite (CA) spektrofotometrik olarak değerlendirildi. Tricine SDS-PAGE ile tüm/k-kazein hidroliz modelini incelemek için 0,5 CA CE ve Enzeco® ünitesi kullanıldı. Enzim karakterizasyonu için inhibisyon çalışmaları yapıldı. Bulgular: Geleneksel olarak yayılan (TP) kök ve onun CE’si yüksek spesifik süt pıhtılaştırma aktivitesi (sırasıyla 1297.30 ± 0.2 U/mg protein ve 926.74 ± 44.13 U/mg protein) ve süt pıhtılaşma indeksi (sırasıyla 103.562 ± 1.162 ve 79.365 ± 4.93) gösterdi. Tüm kazein hidrolitik paterninin 0,5 CA birimiyle karşılaştırılması, yaprak kültürü ve Enzeco® arasında daha yakın benzerlik göstermiştir. Bununla birlikte, k-kazein özgüllük analizi, TP yaprağının Enzeco® ile performansı yakından taklit ettiğini ortaya koymuştur. Sonuç: Çalışma, TP yaprağı CE’sinin peynir endüstrisinde süt pıhtılaştırma aracı olarak çalışmak için etkili ve düşük maliyetli potansiyel bir bitkisel pıhtılaştırıcı olduğunu göstermektedir.