SAHA modulates cell proliferation, colony forming and epithelial-mesenchymal transition in CCA cells

SAHA, CCA hücrelerinde hücre proliferasyonunu, koloni oluşumunu ve epitelyal mezenkimal geçişi modüle eder

Merve ÖZEL, Gülden BAŞKOL, Çiğdem UÇAR, Büşra Nur DOĞRU, Esra Hilal YÜKSEK, Fatma GÜNEŞ, Mevlüt BAŞKOL

Abstract

Background: Therapeutic options for advanced cholangiocarcinoma (CCA) are limited and ineffective due to the largely incomplete understanding of the molecular pathogenesis of this deadly tumor. So that, we planned to investigate epigenetic regulation of epithelial-mesenchymal transition (EMT) in cholangiocarcinoma cell line by applying Suberoylanilide hydroxamic acid (SAHA). We studied the effect of SAHA on cell proliferation, colony forming, migration and protein level of E-cadherin (E-cad) as an epithelial EMT marker, N-cadherin (N-cad) and Vimentin (Vim), as a mesenchymal markers of EMT, in human CCA cell line. Materials and methods: Cell proliferation and migration measurements were performed by flow cytometry and wound healing assay, respectively. E-cad, N-cad and Vim protein levels were determined by Western blot analysis. Results: It was found that SAHA significantly inhibits cell viability, proliferation and migration of TFK-1 cells, accompanied by reversing of EMT markers. SAHA, upregulated protein level of E-cad, while downregulated the protein levels of N-cad and Vimentin. Conclusions: SAHA treatment may bebeneficial for CCA patients and SAHA might be a potential therapeutic agent for the treatment of CCA. However, future studies are needed to evaluate the clinical applicability of SAHA as a part of the chemotherapeutic regimen for CCA.

Özet

Giriş: İlerlemiş kolanjiyokarsinoma (CCA) için tedavi seçenekleri sınırlıdır ve bu ölümcül tümörün moleküler patogenezinin büyük ölçüde anlaşılamaması nedeniyle etkisizdir. Böylece, suberoilanilid hidroksamik asit (SAHA) uygulayarak kolanjiokarsinoma hücre hattındaki epitelyal mezenkimal geçişin (EMT) epigenetik düzenlenmesini araştırmayı planladık. İnsan CCA hücrelerinde; SAHA’nın hücre proliferasyonuna, koloni oluşumuna, migrasyona ve epitelyal belirteç olan E-kaderin (E-kad) protein seviyesi, mezenkimal belirteç olan N-kaderin (N-kad) ve Vimentin (Vim) protein seviyesine olan etkisini araştırdık. Materyal ve metod: Hücre canlılığı ve hücre göçü ölçümleri sırasıyla, flow sitometri ve yara kapanması testi ile gerçekleştirildi. E-kad, N-kad ve Vim protein seviyeleri Western blot analizi ile belirlendi. Bulgular: SAHA’nın, EMT belirteçlerini tersine çevrilmesi ile birlikte, hücre canlılığını, hücre proliferasyonunu ve TFK-1 hücrelerinin migrasyonunu önemli ölçüde inhibe ettiği bulundu. SAHA E-kad protein seviyesini artırırken, N-kad ve Vim protein seviyesini azaltmıştır. Sonuç: SAHA tedavisi CCA hastaları için yararlı olabilir ve SAHA CCA tedavisinde potansiyel bir terapötik ajan olabilir. Bununla birlikte, CCA için kemoterapötik tedavinin bir parçası olarak SAHA’nın klinik uygulanabilirliğini değerlendirmek için gelecekteki çalışmalara ihtiyaç vardır.