Journals / Türk Biyokimya Dergisi / 2019 / Cilt: 44 - Sayı: 3
Post-transcriptional regulation of miRNA-15a and miRNA-15b on VEGFR gene and deer antler cell proliferation
- Journal
- Türk Biyokimya Dergisi
- Pages
- 354–362
- DOI
- —
Abstract
Background: Deer antler is the only regenerative organ inmammals, the regeneration of antler is not only the regenerationof bone tissue, but also accompanied by the regenerationof nerves, blood vessels and so on. The purposeof the current study was to explore the effect of miRNA-15a and miRNA-15b on the regulation of sika deer vascularendothelial growth factor receptor (VEGFR) during rapidantler growth.Materials and methods: The VEGFR 3′-UTR was analyzedby bioinformatics software to identify the highly matchedmiRNAs. After transfected with miRNA mimics, theexpressionof selected miRNAs were measured by RT-qPCRand the relative expression level of VEGFR protein wasdetected by Western Blot. Dual-luciferase activity assay wasused to determine the target relationship between VEGFR andmiRNAs. The cartilage cell proliferation and telomerase activitywere measured by MTT kit and TRAP assay, respectively.Results: The VEGFR 3′-UTR contains a binding site formiRNA-15a and miRNA-15b. Over-expression of miRNA-15aand miRNA-15b, which significantly reduced the expressionlevel of VEGFR protein, inhibited the proliferation ofcartilage cells, and decreased the telomerase activity ofcartilage cells in vitro.Conclusion: miRNA-15a and miRNA-15b represent novelregulatory factors of VEGFR expression in deer antler.
Özet
Amaç: Geyik boynuzu memelilerdeki tek rejeneratif organdır, boynuzun rejenerasyonu sadece kemik dokusunun rejenerasyonu değildir, aynı zamanda sinirlerin, kan damarlarının vb. Bu çalışmanın amacı, miRNA-15a ve miRNA-15b′nin hızlı boynuz büyümesi sırasında, sika geyiği vasküler endotelyal büyüme faktörü reseptörünün (VEGFR) düzenlenmesi üzerindeki etkisini araştırmaktır. Gereç ve yöntem: VEGFR 3′-UTR, yüksek uyumlu miRNA’ları tanımlamak için biyoinformatik yazılımı ile analiz edildi. miRNA taklitleri ile transfeksiyondan sonra, seçilmiş miRNA’ların ifadesi RT-qPCR ile ölçüldü ve VEGFR proteinlerinin nispi ekspresyon seviyeleri Western Blot tarafından tespit edildi. VEGFR ve miRNA’lar arasındaki hedef ilişkiyi belirlemek için çift-lusiferaz aktivitesi analizi kullanıldı. Kıkırdak hücre proliferasyonu ve telomeraz aktivitesi, sırasıyla MTT kiti ve TRAP testi ile ölçüldü. Bulgular: VEGFR 3′-UTR, miRNA-15a ve miRNA-15b için bir bağlanma bölgesi içerir. VEGFR proteininin ekspresyon seviyesini önemli ölçüde azaltan miRNA-15a ve miRNA- 15b′nin aşırı ekspresyonu, in vitro ortamda kıkırdak hücrelerinin proliferasyonunu inhibe etti ve kıkırdak hücrelerinin telomeraz aktivitesini düşürdü. Sonuç: miRNA-15a ve miRNA-15b, geyik boynuzunda VEGFR ifadesinin yeni düzenleyici faktörlerini temsil etmektedir.