Acrylamide-encapsulated glucose oxidase inhibits breast cancer cell viability

[Akrilamid-enkapsüle glukoz oksidaz meme kanseri hücre canlılığını inhibe etmektedir]

Trëndelina RRUSTEMİ, Taylan Kurtuluş ÖZTÜRK, Zeynep YÜCE, Ali KILINÇ, Ali Burak ÖZKAYA, Öykü Gönül GEYİK

Abstract

Objectives: Cancer cells modulate metabolic pathways toensure continuity of energy, macromolecules and redoxhomeostasis.Although these vulnerabilities are often targetedindividually, targeting all with an enzyme may provea novel approach. However, therapeutic enzymes areprone to proteolytic degradation and neutralizing antibodiesleading to a reduced half-life and effectiveness. Wehypothesized that glucose oxidase (GOX) enzyme thatcatalyzes oxidation of glucose and production of hydrogenperoxide, may hit all these targets by depleting glucose;crippling anabolic pathways and producing reactive oxygenspecies (ROS); unbalancing redox homeostasis.Methods: We encapsulated GOX in an acrylamide layerand then performed activity assays in denaturizing settingsto determine protection provided by encapsulation. Afterwards,we tested the effects of encapsulated (enGOX) andfree (fGOX) enzyme on MCF-7 breast cancer cells.Results: GOX preserved 70% of its activity followingencapsulation. When fGOX and enGOX treated with guanidiniumchloride, fGOX lost approximately 72% of its activity,while enGOX only lost 30%. Both formsdemonstrated remarkable resilience against degradationby proteinase K and inhibited viability of MCF-7 cells in anactivity-dependent manner.Conclusions: Encapsulation provided protection to GOXagainst denaturation without reducing its activity, whichwould prolong half-life of the enzyme when administeredintravenously.

Özet

Giriş: Kanser hücreleri, enerji devamlılığı ilemakromolekül üretimini ve redoks homeostazını sağlamak amacıyla metabolik yolakları modüle ederler. Bu hassas noktalar ilaç geliştirme çalışmalarında ayrı ayrı hedeflense de, tümünü bir enzim aracılığıyla aynı anda hedeflemek yeni bir yaklaşım niteliği taşımaktadır. Bununla birlikte, terapötik enzimler ilaç olarak uygulandığında etkinliğinde azalmaya yol açan proteolitik degradasyon ve nötralize-edici antikorlara açık durumdadır. Amaç: Glukozun oksidasyonunu ve hidrojen peroksit üretimini katalizleyen enzim olan glukoz oksidazın (GOX), mikroçevredeki glukozu tüketerek sentez ve enerji üretim yolaklarını engelleme ve redoks homeostazının dengesini bozacak reaktif oksijen türleri açığa çıkarma yollarıyla tüm bu hedefleri vurabileceği hipotezini kurduk. Materyal ve Metotlar: Enzimi akrilamid tabaka içine enkapsüle ettik ve enkapsülasyon tarafından sağlanan korumanın düzeyini, denatüre edici koşullarda aktivite denemeleri ile belirledik. Son olarak, hem serbest (fGOX) hem de enkapsüle GOX’un (enGOX) MCF-7 meme kanseri hücreleri üzerindeki etkilerini belirledik. Sonuçlar: Enkapsülasyon sonrası GOX, aktivitesinin % 70’ten fazlasını korumuştur. GndCl ile muamele edildiğinde, fGOX aktivitesinin %72’sini kaybederken enGOX aktivitesinin yalnızca %30’unu kaybetmiştir. Her iki form da, proteinaz K ile parçalanmaya karşı kayda değer bir direnç sergilemiş ve MCF-7 meme kanseri hücrelerinin canlılığını aktiviteye bağımlı şekilde inhibe etmiştir. Tartışma: Enkapsülasyon GOX’un aktivitesini azaltmadan denatürasyona karşı koruma sağlamıştır. Bu sayede, intravenöz olarak uygulanması durumunda enzimin yarı ömrü uzatılmıştır.