A novel approach for the discrimination of culture medium from Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) overexpressing colorectal cancer cells

[Vasküler Endotelyal Büyüme Faktörünü (VEGF) aşırı ifade eden kolorektal kanser hücre kültür ortamının ayırt edilmesine yönelik yeni bir yaklaşım]

Abstract

Objectives: The expression level of Vascular EndothelialGrowth Factor (VEGF) is assumed as a prognostic marker forseveral tumor types, including colorectal cancer. Therefore,the determination of pre- and post-therapy levels of VEGFappears to have great value in the assessment of tumorprognosis. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) iscommonly used for the determination of serum or plasmaVEGF levels, but the method is costly and time-consuming.In this study,we aimed to describe a rapid and cost-effectiveanalysis method to discriminate VEGF overexpressingcolorectal cancer-derived conditioned medium (CM).Methods: Attenuated Total Reflection (ATR)-FourierTransform Infrared (FTIR) spectroscopy, combined withPrincipal Component Analysis (PCA) and Linear DiscriminantAnalysis (LDA), was used to differentiate VEGF overexpressingcolorectal cancer cell line CM from CM obtainedfrom the corresponding control cells which express andsecrete relatively lower amount of VEGF.Results: Samples belong to VEGF overexpressing colorectalcancer cells were clearly distinguished from thecontrol group with very high PC scores as PC1 + PC2 = 96%.Besides, a 100% accurate distinction between these twogroups was achieved by the LDA analysis.Conclusions: ATR-FTIR spectroscopy combined withpattern recognition techniques was able to discriminateCM of VEGF overexpressing colorectal cancer cells withhigh efficiency and accuracy.

Özet

Amaç: Vasküler Endotelyal Büyüme Faktörünün (VEGF) ifade seviyesi, kolorektal kanser de dahil olmak üzere çeşitli tümör tipleri için prognostik bir belirteç olarak kabul edilmektedir. Dolayısıyla, tümör prognozunun değerlendirilmesinde VEGF’nin tedavi öncesi ve sonrası düzeylerinin belirlenmesinin büyük bir değere sahip olduğu ortadadır. ELISA (Enzime Bağlı İmmünosorbent Deneyi) serum veya plazma VEGF düzeylerinin belirlenmesi için yaygın olarak kullanılır, ancak yöntem pahalı ve zaman alıcıdır. Bu çalışmada, aşırı VEGF ifade eden kolorektal kanser hücrelerinden elde edilen koşullu besiyerini (Conditioned medium-CM) ayırt edebilmek için hızlı ve uygun maliyetli bir analiz yönteminin tanımlanması amaçlanmıştır. Yöntem: VEGF aşırı ifade eden kolorektal kanser hücrelerinden elde edilen CM’nin, görece daha az düzeyde VEGF ifade ve salınımı yapan kontrol hücrelerinden ayırt edilmesi amacı ile Temel Bileşen Analizi (PCA) ve Doğrusal Diskriminant Analizi (LDA), Attenuated Total Reflection (ATR)-Fourier Transform Infrared (FTIR) spektroskopisi ile birlikte kullanılmıştır. Bulgular: Aşırı VEGF ifade eden kolorektal kanser hücrelerine ait örnekler, kontrol grubundan PC1 + PC2 = % 96 olmak üzere yüksek PC skorlarıyla ayırt edilebilmiştir. Ek olarak, LDA analizi ile bu iki grup arasında %100 doğrulukla ayrım sağlanmıştır. Sonuç: Örüntü tanıma teknikleri ile analiz edilen ATRFTIR spektroskopisi, VEGF’nin aşırı ifade edildiği kolorektal kanser hücrelerinden elde edilen CM’nin yüksek etkinlik ve doğrulukla ayırt edilebilmesini sağlamıştır.