Simultaneous Estimation of Saxagliptin and Dapagliflozin in Human Plasma by Validated High Performance Liquid Chromatography - Ultraviolet Method

Saksagliptin ve Dapagliflozin Tarafından Doğrulanmış Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi - Ultraviyole Yöntemi İnsan Plazma Eş Zamanlı Tahmin

Abstract

Objectives: The fixed dose combination of saxagliptin and dapagliflozin is a recently approved antidiabetic medication. It is marketed under thebrand name Qtern. The aim of this study was to develop a simple, rapid, sensitive, and validated isocratic reversed phase-high performance liquidchromatography (RP-HPLC) method for the simultaneous estimation of saxagliptin and dapagliflozin in human plasma using linagliptin as internalstandard as per US-Food and Drug Administration guidelines.Materials and Methods: The method was performed on a Waters 2695 HPLC equipped with a quaternary pump. The analyte separation wasachieved using an Eclipse XDB C18 (150 × 4.6 mm × 5 µm) column with a mobile phase consisting of 0.1% ortho phosphoric acid and acetonitrile(50:50) with pH adjusted to 5.0 at 1 mL/min flow rate.Results: The analyte was detected at 254 nm. The retention time of the internal standard, saxagliptin, and dapagliflozin was 2.746, 5.173, and 7.218min, respectively. The peaks were found to be free of interference. The method was validated over a dynamic linear range of 0.01 to 0.5 μg/mLand 0.05 to 2 μg/mL for saxagliptin and dapagliflozin, respectively, with a correlation coefficient of 0.998. The precision and accuracy of samplesof six replicate measurements at lower limits of quantification level were within the limits. The analytes were found to be stable in human plasmaat -28°C for 37 days.Conclusion: The stability, sensitivity, specificity, and reproducibility of this method make it appropriate for the determination of saxagliptin anddapagliflozin in human plasma.

Özet

Amaç: Saksagliptin ve dapagliflozinin sabit doz kombinasyonu antidiyabetik ilaç tedavisi için onaylanmıştır ve Qtern markası ile pazarda yer almaktadır. Bu çalışmada amaç, insan plazmasındaki saksagliptin ve dapagliflozinin eş zamanlı tayini için Avrupa Gıda ve İlaç İdaresi kılavuzlarına uygun şekilde linagliptin iç standardı kullanarak ve basit, hızlı, hassas ve validasyonu yapılmış izokroatik ters faz-yüksek performanslı sıvı kromatografi (RP-HPLC) yöntemi geliştirmektir. Gereç ve Yöntemler: Method 4’lü akış pompasına sahip Waters 2695 marka HPLC cihazı ile gerçekleştirilmiştir. Analitin ayrılmasında Eclipse XDB C18 kolon (150 × 4.6 mm × 5 µm) kullanılmıştır. Kullanılan mobil fazın bileşimi ise pH 5.0 ayarlanmış %0.1 orto fosforik asit ve asetonitril (50:50) şeklinde olup akış hızı analiz süresince 1 mL/dk’dır. Bulgular: Analit 254 nm’de tayin edilmiştir. İç standart, saksagliptin ve dapagliflozinin alıkonma zamanları sırasıyla 2.746, 5.173 ve 7.218 dk olarak tespit edilmiştir. Pikler interferanslar gözlenmeden elde edilmiştir. Metot validasyonu saksagliptin ve dapagliflozin için sırasıyla 0.01 ile 0.5 μg/mL ve 0.05 ile 2 μg/mL doğrusal derişim aralığında 0.998 korelasyon katsayısı ile gerçekleştirilmiştir. Numunlere ait 6 ölçüme ait kesinlik ve doğruluk tayin sınırları içerisinde bulunmuştur. Analitlerin insan plazması içinde -28°C sıcaklıkta 37 gün boyunca kararlı halde kaldığı belirlenmiştir. Sonuç: Bu yönteme ait elde edilen kararlılık, duyarlılık, özgüllük ve tekrarlanabilirlik sonuçları, geliştirilen bu yöntemin insan plazmasında saksagliptin ve dapagliflozinin belirlenmesi için uygun olduğunu ortaya koymuştur.