Yonca (Medicago sativa L.)'da hücre süspansiyon kültürüyle somatik embriyo üretimi

Somatic embryogenesis in alfalfa (Medicago sativa L.) using cell suspension culture

Özet

Hayvan beslenmesinde önemli bir yere sahip olan yonca, baklagiller içerisinde in vitro rejenerasyon kabiliyeti nedeniyle doku kültürü ve genetik çalışmalarda model bitki olarak kullanılmaktadır. Bu araştırmada yoncanın "verco" çeşidinde hücre süspansiyon kültürüyle yüksek oranda somatik embriyo elde edilmiştir, in vitro'da yetiştirilen verco çeşidine ait steril fidelerden izole edilen yaprak, gövde ve hipokotil eksplantları iki farklı protokol uygulanarak kültüre alınmıştır. Protokollerden birinden sonuç alınamamıştır. Sonuç alınan diğer protokolde 1-2-4 mg/l 2,4-D ve 0.2 mg/l kinetin içeren (%25 prolin + %50 KCI eklenen) katı SH besin ortamında kültüre alınan eksplantlar kallus oluşturduktan sonra 1 mg/l 2,4-D içeren sıvı Bs besin ortamına aktarılarak, 1 hafta aralıklarla alt kültür yapılmıştır. Her alt kültürden sonra 1 mi sıvı süspansiyon kültürü katı Boi2y besin ortamına yayılmıştır. Bu ortamda somatik embriyo oluşumu başlamıştır. Gelişen embriyolar MSO besin ortamına aktarılmıştır. Bu denemede en fazla somatik embriyo oluşumu petri başına 150 adet ile 4 mg/l 2,4-D içeren ortamda kültüre alınan yaprak eksplantlarından elde edilmiştir. Bu embriyoların önemli bir kısmı (%70)bitkiye dönüşmüştür.

Abstract

Alfalfa is an important forage crop. Due to high rejeneration capacity, it is used in tissue culture and genetic transformation studies as a model plant among legumes. This study reports high frequency of somatic embryogenesis from cv. Verco using cell suspension culture. Various expiants including leaf, stem and hypocotyl obtained from sterile plantles were cultured using two different protocols. No results were obtained from the one of the protocols. In the other protocol the expiants cultured on modified SH medium ( 25% proline + 50% KCI) containing 1-2-4 mg/l 2,4-D and 0.2 mg/l kinetin after caliusing were transferred to liquid Bs medium containing 1 mg/l 2,4-D. These were subcultured every week and 1 ml of suspension culture were cultured on Boi2y by gentle spreading, which subsequently developed somatic embryos. Developing embryos were transferred to MSO medium for recovery. The highest somatic embryos (150) per Petri dish were obtained from leaf expiants previously cultured on SH medium containing 4 mg/l 2,4-D. Significant number of these embryos (70%) developed into plants.