Turunçgil tristeza virüs (CTV) ırklarına spesific monoklonal antibadi'lerin üretilmesi ve CTV ırklarının tanılanmasında kullanılması

Production of specific monoclonal antibodies of citrus tristeza virus (CTV) and usage in CTV stains diagnosis

Abstract

CTV was purified by column chromalography and sucrose density gradient cenlrifugation methods. However, more concentrated virus particles were obtained by column chromatography. The absorption spectrum at 260/280 ratio and virus yield were 1.20 and 454 mg/ml respectively. Two bands were observed in SDS- PAGE and the molecular weight of CTV coat proteins was defined as 26 and 27 ± 1000 kDa. CTV was detected by ELISA lest, ISEM and slot-blolting. Al the end of fusions, a hybrid cell clone (1G8) was obtained for CTV specific anlibody. 1G8 was reacted lo the Igdir, Serdengecti and Cyprus isolates of CTV with PTA-I ELISA. However, 1G8 did not react to Ihe Serdengecti isolate with DAS-I ELISA.

Özet

CTV kolon kromatografi ve sukroz density gradient santrifügasyon yöntemleri kullanılarak saHaşlmlmışlır. Farelerin bağışıklanmasmdu ve monoklonal antibody ile ilgili scrolojik çalışmalarda, daha saf virüs elde edildiğinden kolon kromatografi yönteminden elde edilen preparasyonlar kullanılmıştır. UV absorbsiyon spektrumu oranı(260/280) 1.20 saplanmıştır. SDS-PAGE sonucunda CTV kılıf proteinlerinin moleküler ağırlıkları yaklaşık olarak 26 ve 27 000 kDa bulunmuştur. Ayrıca, CTV izolatları ELISA, İSEM ve slot-blolling yöntemleri kullanılarak saptanmıştır. Füzyon sonunda, CTV spesifik monoklonal antikor üreten bir hibril hücre haltı (IG8) elde edilmiştir. IG8, PTA-I ELISA leslinde İğdır, Serdengeçti ve Kıbrıs, izolatları ile reaksiyon vermiş, DAS- ELISA leslinde ise, Serdengeçti i/olalı reaksiyon vermem i şii r.