Lenalidomide etkisinin glioblastoma hücreleri üzerinde in vitro koşullarda değerlendirilmesi

Melike MUT, Gerard REDPATH, Gregory POLAR, Joan E. CARPENTER, James LARNER, David SCHIFF, Mark E. SHAFFREY

Abstract

Purpose: Thalidomide analog, Lenalidomide (Revlimid®) is a chemotherapeutic agent. In this study, lenalidomide was used in human glioblastoma multiforme (GBM) cell lines to determine its pro-apoptotic, anti-proliferative and radiosensitizing properties.Methods: The GBM cells were treated with lenalidomide [0, 1, 5, 30, 60 µM] before ultravioletB (UVB) [0, 50, 100 mj] or γ -irradiation [0, 5, 20 Gy], and kept in drug for 5 days. Viable cell numbers were determined by trypan blue exclusion. The cell proliferation index was assessed by[ 3H]-Thymidine incorporation. Apoptosis was assessed by flow cytometry with Sub G0 gating and the activation of caspase-8 and caspase-9 after the treatments were completed. Results: Lenalidomide alone or in combination with UVB or γ-irradiation did not have a significant effect on cell death. Lenalidomide had minimal synergistic effect with γ-irradiation to reduce cell growth. Lenalidomide when used alone had an insignificant stimulatory effect on cell proliferation in GBM cells at doses 1-30 µM. Lenalidomide did not activate caspase-8 or caspase-9 pathways. Conclusions: Lenalidomide had a weak synergistic effect with γ-irradiation in decreasing cell growth in vitro. It may not be a therapeutic agent in the in the absence of γ-irradiation for the treatment of GBM.

Özet

Amaç: Kemoterapide kullanılan ilaçlardan biri olan Thalidomide analogu Lenalidomide’in insan glioblastoma multiforme (GBM) hücreleri üzerinde pro-apoptotik, çoğalmayı azaltıcı ve radyasyona karşı duyarlılığı artırıcı etkilerinin araştırılması Yöntem: GBM hücreleri lenalidomide’e [0, 1, 5, 30, 60 µM dozlarında] 5 gün boyunca maruz bırakıldı ve ardından ultravioletB (UVB) [0, 50, 100 mj] veya γ-radyasyonu [0, 5, 20 Gy] verildi. Bu işlemler sonrası yaşayan hücreler “trypan blue exclusion” testi ile sayıldı. Çoğalma endeksi timidin inkorporasyonu ile, apoptoz ise sub G0 kestinin bakıldığı akım sitometre ve kaspaz aktivasyonu ile değerlendirildi.Bulgular: Lenalidomide tek başına veya UVB veya g-radyasyon ile birleştirildiğinde hücre ölümüne ek katkıda bulunmadı. Sadece γ-radyasyon ile minimal bir sinerjistik etki göstererek hücre çoğalmasını azalttı. Önemlilik derecesine ulaşmasa bile tek başına 1-30 µM dozlarda verildiğinde hücrelerin çoğalmasına katkıda bulundu. Lenalidomide apoptoz ile sonuçlanan kazpaz yollarını aktive etmedi. Sonuç: Lenalidomide in vitro deney koşullarında γ-radyasyon ile verildiğinde minimal bir sinerjistik etkiye sahiptir. Lenalidomide GBM tedavisinde γ -radyasyon yokluğunda etkin bir ajan olmayabilir.