Fare hipotalamik suprakiazmatik nükleusun organotipik kesit kültüründe calbindin- D28k immünoreaktivitesindeki değişiklikler

Changes in calbindin- D28k immunoreactivity in the organotypic slice culture of mouse hypothalamic suprachiasmatic nucleus

Abstract

The hypothalamic suprachiasmatic nucleus (SCN) is of the main circadian pacemaker in mammals. Calbindin-D28k (Calbindin) is a calcium-binding protein that is distributed widely in the mammalian brain. In vivo the localization of Calbindin immunoreactivity (CalB-ir) in mouse SCN was examined before. However, detailed information about the localization and developmental distribution of CalB-ir neurons in the mouse SCN slice culture is lacking. SCN derived from 3 day old mouse, were maintained in culture at the interface between air and a culture medium. CalB-ir neurons are detected within the general central SCN area and the surrounding region. CalB-ir neurons showed variations in morphology where the majority of neurons were stellate and round or oval cells with multipolar dendrites. The density of CalB-ir was clearly decreased during the SCN development in organotypic slice cultures at the level of the cell bodies and the fibers. These findings may provide new morphologic evidences for explaining the functional mechanism in the SCN.

Özet

Hipotalamik suprakiazmatik nükleus (HSN) memelilerde 24 saatlik düzeni sağlayan ana unsurdur. Calbindin-D28k (Calbindin) kalsiyum bağlayıcı bir protein olarak memeli beyninde bol miktarda bulunur. Calbindin immünoreaktivite lokalizasyonu in vivo olarak fare HSN’da daha önceleri araştırılmıştır. Ancak, fare HSN kesit kültürlerindeki CalB-ir nöronlarında yerleşim ve gelişimi ile ilgili ayrıntılı bilgiler eksik kalmıştır. HSN üç günlük fareden elde edilerek hava ve kültür ortamında tutuldu. CalB-ir nöronları HSN merkezi ve çevresel bölgelerinde saptandı. CalB-ir nöronları morfolojik olarak çoğunlukla yıldızımsı, yuvarlak ya da oval hücre gövdeleri ve çok sayıdaki dendritleri ile değişiklikler gösterdi. Hücre gövdeleri ve fibriller düzeyde organotipik kesit kültürlerinde HSN gelişimi sırasında CalB-ir yoğunluğunda açıkca bir azalma oldu. Bu bulgular HSN’de işlevsel mekanizmanın açıklanmasında yeni morfolojik kanıtlar olabileceğini gösterebilir.