Yeni bir insan netrin-G2 geninin özelliği ve klonlanması

Abstract

The Netrins is one of a small phylogenetically conserved family members which are laminin- related secreted proteins. The Netrins play a critical role in cell migration and axon guidance. Its homologues have been widely described in various animals. Netrins can be subdivided into two subfamilies, classical Netrins and Netrin-Gs. Since the members of Netrin-G subfamily exhibit a high degree of similarity and there is only one member, Netrin-G1, identified in human, it is presumed that there must be new members in human too.In this paper the total RNA in brains was extracted from 20 weeks human embryos, and the cDNA Library was constructed by using a cDNA PCR Library Kit. A full-length human netrin-G cDNA, named netrin-G2, was generated by using special primers and PCRs. Finally, a primary study about the expression of human netrin-G2 was carried out by northern blot analysis and a research about the relationship between human Netrin-G2 and other Netrins family members was determined by phylogenetic tree analysis. Human netrin-G2 was indeed a new member of netrin-G subfamily, which mapped to chromosome 9q34. The final assembled cDNA sequence of human netrin-G2 was 2428 bps in length, which could encoding a 530-amino acid protein. Northern blot analysis revealed that netrin-G2 expressed specifically in brain and seldom in other tissues.These results suggested that netrin-G2 might play an important role in the development of central nervous system and might contribute to excitatory neurotransmission and neural modulation.

Özet

Laminine bağlı olarak salgılanan bir protein olan netrinler filogenetik olarak korunmuş küçük bir ailenin bireyleridirler. Netrinler akson ve hücre yönlenmesinde kritik rol üstlenirler. Homologları değişik hayvan türlerinde yaygın olarak tanımlanmıştır. Netrinler klasik Netrinler ve Netrin-G’ler olarak iki alt gruba ayrılırlar. İnsanda Netrin-G alt grubunda şimdiye dek sadece Netrin-G1 tanımlanmıştır ve diğer üyelerin de varlığı birbirine benzerlikleri düşünüldüğünde ortaya atılabilir.Bu makalede 20 haftalık insan embryosundan elde edilen beyin toplam RNAsıyla, “cDNA PCR Library” kiti kullanılarak “cDNA Library” oluşturulması gündeme getirildi. Özel primerler ve PCRlar kullanılarak insan tam uzunlukta netrin-G cDNAsı üretilerek buna netrin-G2 adı verildi. Son olarak insan netrin-G2 geni northern blot analizi ile eksprese edildi ve diğer netrin-G aile üyeleri ile ilişkisi filogenetik ağaç analizleri ile ortaya kondu. İnsan Netrin-G2 geninin gerçekten bir alt grup oluşturduğu ve kromozom 9q34 lokusunda yer aldığı haritalandı. Birleştirilen son netrin G2 cDNA dizisi 2428 bps uzunluğunda ve 530 amino asit kapsayabilen bir protein idi. Northern blot analizi netrin-G2 nin özellikle beyinde bulunduğu ve diğer dokularda çok ender olduğu ortaya kondu.Bu sonuçlar santral sinir sistemi gelişiminde netrin-G2’nin önemli bir rol oynadığını işaret etmekte ve eksitatör nörotransmisyon ve nöral modülasyona katkıda bulunabileceğini göstermektedir.