Retinoik Asit ve Kemoterapötik Ajanların Nöroblastomda Nmyc'in Ultrasrtürüktürel Lokalizasyonuna Etkisi

Effect of Retinoic Acid and Chemotherapeutic Agents on Untrastructural Localization of Myc-N in Neuroblastoma

Abstract

The effect mechanism of pharmacological agents used in neuroblastoma treatment on myc-Nexpression is still unclear. Myc-N amplification does not change with any agent. The aim ofthis study is to investigate the effect of chemotherapeutic agents and retinoic acid on ultrastructural localization of myc-N in neuroblastoma. We analyzed ultra structural localizationchanges of myc-N by immunoelectron microscopy in myc-N positive, Kelly humanneuroblastoma cell line using retinoic acid and cytotoxic drugs (cisplatin, vincristine,cyclophosphamide, etoposide, doxorubicin) and their combinations incubated for 24 hours inpreoptimised LD50 doses in cell culture compared with control conditions. Myc-N wasapplied by immunoelectron microscopy method using colloidal gold for visualisation. Resultswere scored semi quantitatively as negative, mild, moderate, or high positive in nucleus,ribosomal and cell membrane. Immunogold particles labeling myc-N was high in nucleus,ribosomes and low in cell membrane in control tumor cells without any drug. It was moderatein nucleus in retinoic acid, cyclophosphamide, etoposide, cisplatin and their combinationsgroups. The nuclear expression was mild in, vincristine, doxorubicin and their combinationsgroups. It was negative in ribosomes in all combination groups and doxorubicin and retinoicacid combined with vincristine group. Chemotherapeutic agents and their combinationscaused a prominent decrease in myc-N expression in cell membrane, a medium level decreasein ribosomal level and a low decrease in nuclear ultra structural localization. Myc-Nexpression is reduced with cytotoxic agents and retinoic acid especially in ribosomal units.Retinoic acid combined with vincristine or doxorubicin is the most effective combination toreduce myc-N expression.

Özet

Nöroblastom n-myc amplifikasyonunun kötü prognostik belirleyici olduğu iyi bilinen önemlibir pediatrik tümördür. Farklı klinik davranışlar göstermektedir. Nöroblastom tedavisindekullanılan farmakolojik ajanların n-myc ekspresyonuna etkisi tam olarak açıklanmamıştır.Kelly insan nöroblastom hücrelerine, retinoik asit ve sitotoksik ajanlar (sisplatin, vinkristin,siklofosfamid, etoposid, doksorubisin) ile bunların kombinasyonları; LD50 optimize edilmişdozlarında 96 kuyucuklu kültür ortamında 24 saat uygulanmıştır. N-myc ekspresyonuimmunsitokimyasal olarak, n- myc amplifikasyonu floresan in situ hibridizasyon ilearaştırılmıştır. İmmunoelektron mikroskop ile koloidal gold işaretli n-myc'in intrasellülerlokalizasyon değişimi araştırılmıştır. N-myc amplifikasyonu 20 kopyadan daha yüksek oluphiçbir ajan ya da kombinasyonu ile değişmemiştir. N-myc protein ekspresyonu kontrol ve doksorubisin grubunda yüksekken, retinoik asit, siklofosfamid, retinoikasit-siklofosfamidkombinasyonu ve retinoik asit doksorubisin kombinasyonunda ortadır. Sisplatin, vinkristin,etoposit, retinoik asit-etoposit kombinasyonu ve retinoik asit-sisplatin kombinasyonunda iseekspresyon düşüktür. Retinoik asit-vinkristin kombinasyonuda ise n-myc negatiftir.İmmunoelektron mikroskobisinde NB kelly hücre hattında KT ajanların, özellikle vinkristinve doksorubisinin ve kombinasyonlarının nmyc ekspresyonunu hücre membranı düzeyindebelirgin, ribozomal düzeyde orta şiddette ve nükleer ekspresyonu hafif düzeyde azaltmaktadır.Nöroblastomda n-myc ekspresyonu sitotoksik ajanlarla ve retinoik asit ile azalmakta ancakamplifikasyonu aynı kalmaktadır. N-myc ekspresyonunu azaltan en etkili kombinasyonretinoik asit vinkristin kombinasyonudur.