C-Jun N-Terminal Kinaz Sıçan Trigeminal Ganglionunda in Vitro Olarak Kalsitonin Gene-bağlı Peptid Yapımını Düzenler

C-Jun N-Terminal Kinase Mediates Calcitonin Gene-Related Peptide Expression in Rat Trigeminal Ganglion in Vitro

Guo-Gang LUO, Bo-Bo YUAN, Xing-Yun YUAN, Kang HUO, Wen-Jing FAN, Min She LU, Yong-Xiao CAO, Yaping ZHANG

Abstract

Objective: Calcitonin gene-related peptide (CGRP) plays a prominent role in migrainepathophysiology. However, the underlying molecular mechanisms that are responsible forregulating CGRP expression are not fully understood. Using an in-vitro model of organculture of rat trigeminal ganglion (TG), the present study aims to investigate the role of c-JunN-terminal kinase (JNK) in regulation of CGRP.Methods: The TG was isolated from Sprague-Dawley (SD) rats and then organ cultured inpresence of inflammatory cytokines tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) (50μg/L) orinterleukin-1β (IL-1β) (25μg/L) with and without a specific JNK inhibitor SP600125 (10-5M)or an anti-migraine drug sumatriptan (0.5g/L) for 24h. Real-time polymerase chain reaction(RT-PCR) and Western blotting were used to evaluate the CGRP-mRNA expression andphosphorylated JNK (pJNK) protein in rat TG after the organ culture.Results and Conclusions: The JNK inhibitor significantly reduced the organ culture andcytokines-induced up-regulation of CGRP-mRNA expression compared with control(P

Özet

Amaç: Kalsitonin gene-bağlı peptid (CGRP) migren patofizyolojisinde önemli bir rol oynar.Bununla beraber CGRP oluşumunun düzenlenmesinde altta yatan moleküler mekanizma tamolarak anlaşılmış değildir. Bu çalışmada sıçan trigeminal ganglion (TG) organ kültürü in vitromodeli kullanılarak c-Jun N-terminal kinazın CGRP regülasyonundaki rolü araştırılmaktadır.Yöntem: Sprague-Dawley (SD) sıçanlarının TG'ları izole edildi ve ortamda yangısalsitokinler tümör nekroz faktörü-alfa (TNF-α) (50μg/L) ya da interlökin-1β (IL-1β) (25μg/L) ile bir spesifik JNK inhibitörü SP600125 (10-5M) birlikte veya olmaksızın ya da bir migrenilacı olan sumatriptan (0.5g/L) bir gün boyu uygulandı. Organ kültürü sonrası sıçan TG'ndafosforilize olan JNK (pJNK) proteini ve CGRP-mRNA miktarı değerlendirilmesi için gerçekzamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR) ve Western blotting kullanıldı.Sonuç ve Yorum: JNK inhibitörü, transkripsiyonel bir mekanizmayı işaret edercesine, organkültürü ve sitokinin oluşturduğu CGRP-mRNA miktarının regülasyonunu kontrollere göreönemli ölçüde azalttı (P