Preparation of O-antigen from Yersinia ruckeri Serotype O1 and Use in the Slide Agglutination Test

Yersinia ruckeri Serotip O1'den O-antijenin Hazırlanması ve Lam Aglütinasyon Testinde Kullanımı

Abstract

In this study, it was aimed at early detection of yersiniosis caused by Yersinia ruckeri in rainbow trouts (Oncorhynchusmykiss) using an agglutination test. O-antigen of Y. ruckeri isolated from diseased fishes was prepared. This prepared O-antigen was injectedinto the ear vein of the rabbit. Serum was removed from blood samples taken on the 7th and 15th days after the last injection. Thus, the antibodyof the Yersinia ruckeri was produced in the rabbit. Titers of the resulting antibodies were determined by microtitering in 96 well-based plates. Itwas used successfully in the slide an agglutination tests by making necessary dilutions according to the titer ratios of the antibodies. Wedetermined that the motile and Gr (-) bacteria isolated from diseased rainbow trout with yersiniozis symptom were Y. ruckeri according to theresults of slide agglutination test without any biochemical test. The isolated bacteria were confirmed to be Y. ruckeri with the results of API 20Etest kit and PCR test. The antibodies were stored at -20 and -80°C for use subsequent studies.

Özet

Bu çalışmada, aglütinasyon testi kullanılarak gökkuşağı alabalıklarında (Oncorhynchus mykiss) Yersinia ruckeri’nin sebep olduğu yersiniozisin erken teşhisi amaçlanmıştır. Hastalıklı balıklardan izole edilen Y. ruckeri’nin O-antijeni hazırlandı. Hazırlanan bu O-antijeni tavşanın kulak venasına enjekte edildi. Son enjeksiyondan sonraki 7. ve 15. günlerde alınan kan örneklerinden serum çıkarıldı. Böylece, Y. ruckeri antikoru tavşanda üretildi. Elde edilen antikorların titreleri, 96 kuyucuklu platelerde mikrotitrasyon ile belirlendi. Antikorların titre oranlarına göre gerekli dilüsyonlar yapılarak slayt aglütinasyon testlerinde başarıyla kullanılmıştır. Yersiniozis belirtisi gösteren hastalıklı gökkuşağı alabalıklarından izole edilen hareketli, oksidaz negatif ve Gr (-) bakterilerin biyokimyasal test yapılmadan lam aglütinasyon testi sonuçlarına göre Y. ruckeri olduğu tespit edildi. İzole edilen bakterilerin API 20E test kiti ve PCR testi sonuçları ile Y. ruckeri olduğu doğrulandı. Antikorlar, daha sonraki çalışmalarda kullanılmak üzere -20°C ve -80°C’de stoklandı.