Effects of different fixation processes on liver size: A stereological study

Farklı fiksasyon işlemlerinin karaciğer boyutu üzerine etkisi: Stereolojik bir çalışma

Abstract

Objective: As it is well known, the first stage of microscopic processes is fixation. Formaldehyde and pair ofgluteraldehyde-osmium tetraoxide are commonly used in light and electron microscopical process respectively. Aimof this study was to evaluate effects of both fixatives on liver size by Cavalieri principle, a stereological technique.Material and Methods: In the present study, 5 adult, female Sprague Dawley rats were utilized. After volumes ofremoved livers were determined by water immersion method, handled liver samples were fixed in 10%formaldehyde solution for light microscopical examination (group 1; n= 10 liver pieces). In electron microscopicalprocess, it was carried out post-fixation by 1% osmium tetraoxide buffered 0.2 M phosphate after pre-fixation,made by 3% gluteraldehyde buffered with 0.2 M phosphate (group 2; n= 10 liver pieces). Then thick (5 µm), semi- thin (1 µm) sections handled from all blocks were photographed via light microscope with camera attachment andliver volumes were measured with Cavalieri principle on this images. Consequently the results of two groups werecompared with each other and it was evaluated statistically.Results: According to our results, mean liver volumes via water immersion method and liver volumes of two groups3respectively. Difference between both mean volume values of two groupswere estimated as 9.178, 9.104-8.522 mm and between volumetric values by water immersion method and the second group was significant, statistically (p< 0,05; Independent Samples T Test).Conclusions: In the literature, some studies are available about comparison of fixation effectiveness betweenformaldehyde and glutaraldehyde-osmium tetraoxide in specially immunohistochemical studies. But there is not anystudy concerning effects of these fixatives on liver size till now.

Özet

Amaç: Bilindi i gibi mikroskobik takip i lemlerinin ilk a aması fiksasyondur. I ık mikroskobik takip i lemlerindeformaldehit elektron mikroskobik takip i lemlerinde ise gluteraldehit-osmium tetraoksit ikilisi fiksasyon amacıylayaygın olarak kullanılmaktadır. Bu çalı mada her iki fiksatif kullanımının karaci er boyutu üzerindeki etkisininstereolojik bir teknik olan Cavalieri Prensibi ile de erlendirilmesi amaçlandı.Gereç ve Yöntem: Çalı mada 5 adet eri kin, di i Sprague Dawley cinsi sıçan kullanıldı. Her denekten alınankaraci erlerin hacimleri suya daldırma metodu (SDM grubu) ile ölçüldükten sonra alınan karaci er örnekleri ı ıkmikroskobik inceleme için %10’luk formaldehit ile fiksasyon i lemine tabi tutuldu (grup 1; n= 10 parça karaci er).Elektron mikroskobik incelemede ön fiksasyon için %3’lük gluteraldehit vepost fiksasyon için % 1’lik fosfattamponlu osmium tetraoksit kullanıldı (grup 2; n=10 parça karaci er). Daha sonra tüm bloklardan elde edilen kalını ve bu foto raflar(5 µm) ve yarı ince (1 µm) seri kesitler kameralı bir ı ık mikroskobu yardımıyla foto rafland üzerinde Cavalieri metodu(CM) ile hacim ölçümü yapıldı. Takiben elde edilen sonuçlar kıyaslandı ve istatistikselolarak de erlendirildi.Bulgular: Çalı mamızın sonuçlarına göre SDM grubu, grup 1 ve grup 2’ ye ait karaci erlerin ortalama hacimleri3olarak hesaplandı. Hem grup 1 ve 2’nin hacim de erleri arasında hem de SDMsırasıyla 9.178, 9.104 ve 8.522 mm grubu ile 2. grubun sonuçları arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulunmaktaydı (p< 0,05; IndependentSamples T Test).Sonuç: Literatürde özellikle immünohistokimyasal çalı malarda gluteraldehit- osmium tetraoksit çifti veformaldehitle fiksasyonun etkinli inin kıyaslandı ı çalı malar mevcuttur. Fakat günümüze kadar bu fiksatiflerinkaraci er boyutu üzerine etkisi ile ilgili herhangi bir çalı ma yapılmamı tır. Bu çalı mada gluteraldehit-osmiumtetraoksit kombinasyonu ve formaldehitin karaci er boyutu üzerinde farklı etkileri oldu u tarafsız bir yöntem olanstereolojik yakla ımla gösterilmi tir.