Comparison of double disk synergy test and isoelectric focusing methodology results for the detection of extended-spectrum beta-lactamases

Genişletilmiş spektrumlu beta-laktamaz tanımlanmasında çift disk sinerji testi ve izoelektrik odaklama yöntemi ile elde edilen sonuçların karşılaştırılması

Abstract

Double Disk Synergy Test (DOS), is used as a screening test for extended spectrum beta-lactamase (ESBL) production. Nevertheless, the sensitivity of the test has been controversial. In this study, using 44 Klebsiella pneumoniae strains we compared the DDS results with the enzyme patterns detected by isoelectric focusing (IEF). ESBL production was detected in 56.8% (25/44) and 88.6% (39/45) of the strains by the standard and modified double disk synergy tests, respectively. The results could not be determined in three strains by the standard and in two strains by the modified DDS, as there were no inhibition zones around the disks. The remaining three isolates were ESBL negative by both DDS tests. When IEF was performed, beta-lactamase bands which co-focussed with SHV-type ESBLs were detected in the sonicates of all DDS positive strains and the three isolates in which the tests were undetermined. The sonicates of the two strains which were ESBL negative by the DDS tests, contained chromosomal enzyme bands with pis of 8.8-9.2, only whereas one strain had two bands with pis 5.4 and 9.0. The beta-lactam susceptibility profiles of the strains were also comparable with the IEF patterns.

Özet

Çift Disk Sinerji Yöntemi (CDS), genişletilmiş spektrumlu beta-laktamaz (Extended Spectrum Beta-Lactamase; ESBL) üretiminin saptanmasında bir tarama testi olarak kullanılmaktadır. Ancak etkinliği açısından farklı görüşler vardır. Bu çalışmada, 44 Klebsiella pneumoniae suşu kullanılarak çift disk sinerji yöntemiyle elde edilen sonuçlar, izoelektrik odaklama (IEF) ile saptanan enzim paternleri ile karşılaştırıldı. Standart ÇDS ile suşların %56.8'inde (25/44), diskler arasındaki uzaklığın 20 mm olarak uygulandığı modifiye yöntem ile de %88.6'sında (39/45) ESBL varlığı saptandı. Standart yöntem ile üç, modifiye yöntem ile iki suşta inhibisyon zon çapları bulunmaması nedeniyle, ÇDS sonucu değerlendirilemedi. Üç susta ise, bu yöntemler ile ESBL üretimi negatifti. Bakterilerden elde edilen sonik ekstreler IEF ile incelendiğinde, ÇDS ile ESBL pozitif bulunan suşların tümünde ve değerlendirilemeyen üç suşta özellikle SHV tipi genişletilmiş spektrumlu beta-laktamazlar ile uyumlu yerleşimde bantlar saptandı. Negatif bulunan suşlardan ikisinde sadece izoelektrik noktaları (pl) 8.8-9.2 olan ve kromozomal beta-laktamazlar ile uyumlu olabilecek bantlar gözlenirken, birinde pl 5.4 ve 9.0 olan iki bant belirlendi. Suşların beta-laktam antibiyotiklere duyarlılık profillerinin de IEF sonuçları ile paralel olduğu saptandı.