Molecular analysis of resistance plasmids carrying TEM-type of beta-lactamase gene in enteric bacteria

Enterobakterilerde TEM-tipi beta-laktamaz geni taşıyan direnç plazmitlerinin moleküler analizi

Osman Birol ÖZGÜMÜŞ, Murat ERTÜRK, Şebnem Nur YILMAZ, Faruk AYDIN, İlknur TOSUN, Ali Osman KILIÇ

Abstract

The purpose of this study was to determine R-plasmids carrying TEM-type P$beta$-lactamase gene in clinical isolates of enteric bacteria. Resistance-plasmids bearing blaTEM genes were investigated in 64 enterobacteria (28 Escherichia coli, 17 Proteus spp., 15 Klebsiella spp. and 4 Enterobacter spp.) isolated from various clinical specimens in year 1999. Thirty-five strains were determined to contain one or more plasmids by alkaline lysis method. Of 25 strains with plasmid which were resistant to ampicillin, five conjugatively transferred this resistance to a rifampicin resistant E. coli C600. By using total plasmid preparations from these strains, ampicillin resistances were tried to transform to a competent E. coli JM109 by heat shock. In ampicillin selection, seven transformants were obtained. Seven plasmids were determined to carry blaTEM gene by polymerase chain reaction (PCR). Comparing resistance patterns of transformants and transconjugants to their representative strains, co-transferred antibiotic resistance such as resistances to amikacin and trimethoprim-sulfamethoxazole other than $beta$-lactam resistance were also determined. In conclusion, it is suggested that serious precautions should be taken against irrational use of $beta$-lactams around the country to prevent the evolution progress of $beta$-lactam resistance genes occurring in hospital bacteria.

Özet

Bu çalışmanın amacı, enterik bakterilerde TEM-tipi beta -laktamaz geni taşıyan direnç plazmitlerini saptamak idi. Çalışmada, 1999 yılında çeşitli klinik örneklerden izole edilen 64 enterobakteride (28 Escherichia coli, 17 Proteus spp., 15 Klebsiella spp. ve dört Enterobacter spp.) blajm geni taşıyan R-plazmitleri araştırıldı. Alkali lizis yöntemi ile 35 susun bir veya daha fazla sayıda plazmit içerdiği belirlendi. Ampisiline dirençli ve plazmit taşıyan 25 susun beşi bu direnci konjugatif olarak rifampisine dirençli E. coli C600'e aktardı. Bu suşlardan elde edilen toplam plazmit preparatları kullanılarak ampisiline dirençleri ısı şoku ile kompetan E. coli JM109'a transform edilmeye çalışıldı. Ampisilin seleksiyonunda yedi transformant elde edildi. Polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) ile yedi plazmitin blaTEM geni taşıdığı saptandı. Transkonjugant ve transformantların direnç paternleri temsilci suşlarıyla karşılaştırıldığında, $beta$-laktam direnci yanında amikasine ve trimetoprim-sulfametoksazola direnç gibi kotransfer edilen antibiyotik dirençleri de belirlendi. Sonuçta, hastane orijinli bakterilerde ortaya çıkan beta-laktamlara karşı direnç genlerinin evrimsel ilerleyişinin önlenmesi için, ülke çapında irrasyonel $beta$-laktam kullanımına karşı ciddi önlemlerin alınması gerekir.