Investigation of protease activities of trichophyton rubrum and trichophyton mentagrophytes obtained from clinical isolates

Klinik izolatlardan elde edilen trichophyton rubrum ve trichophyton mentagrophytes'in proteaz aktivitelerinin araştırılması

Abstract

We aimed to investigate the protease activities of Trichophyton rubrum and Trichophyton mentagrophytes isolated from Kahramanmaraş State Hospital.The samples from nail and skin were collected from patients who had suspicious infection presented to Department of Dermatology of Kahramanmaras State Hospital. The samples were treated with 15% KOH and, then microscopic examination and culturing was carried out on Saboraud Dextrose Agar. Cultures were defined and Trichophyton rubrum and Trichophyton mentagrophytes' isolates were differentiated. The caseinolytic properties of Trichophyton rubrum and Trichophyton mentagrophytes were investigated.The strains found to be casein positive as, Tr2(Trichophyton rubrum2), Tr3, Tm(Trichophyton mentagrophytes321)207, Tr319 ve Tm321were tested for protease activity. Dermatophyte strains were incubated for enzyme production for 23 days under certain circumstances. The highest protease activity was obtained at 13.1U/ml from the strain Tr2 after 14 days of incubation. Tr3, Tr319, Tm207, and Tm321 produced the enzyme activity as 12.3 U/ml, 8.71 U/ml, 7.65 U/ml, and 7.4 U/ml, respectively. Our results showed that the dermatophytes which are keratinolytic fungi had significant amount of protease enzyme and this might constitute potentially a significant virulence factor in the pathogenicity.

Özet

Bu araştırmada; Kahramanmaraş Devlet Hastanesinden izole edilen Trichophyton rubrum ve Trichophyton mentagrophytes'in proteaz aktivitesinin araştırılması amaçlandı.Mantar şüphesi olan ve Kahramanmaraş Devlet Hastanesi Dermatolopji kliniğine başvuran hastalardan tırnak ve kazıntı örnekleri alındı. Örnekler % 15'lik KOH ile muamele edilerek mikroskopta direkt inceleme yapıldı. Direkt mikroskobik inceleme ile mantar hif ve sporlarının varlığı/yokluğu araştırıldı. Ayrıca Sabouraud Dekstrose Agar(SDA) besiyerlerine ekimler yapılarak kültürleri gerçekleştirildi. Kültürlerin tanımlanması yapılarak T. rubrum ve T. mentagrophytes suşları ayrıldı. T. rubrum ve T. mentagrophytes suşlarının kazeinolitik özellikleri incelendi.Kazeinolitik özellikleri pozitif olarak belirlenen Tr2(Trichophyton rubrum2), Tr3, Tm(Trichophyton mentagrophytes321)207, Tr319 ve Tm321 suşlarının proteaz aktivitesi araştırıldı. Dermatofit suşları, enzim üretimi için belirli koşullarda 23 gün süre ile inkübasyona bırakıldı. En yüksek proteaz aktivitesi Tr2'de 14 gün inkübasyon süresi sonunda 13.1 U/ml olarak, daha sonra Tr3 12.3 U/ml, Tr319 8.71 U/ml, Tm207 7.65 U/ml, Tm321 7.4 U/ml olarak elde edildi. Çalışmamızda en yüksek proteaz aktivitesi 50 ºC inkübasyon sıcaklığında, pH 5.5 ile 6 arasında 14 U/ml olarak elde edildi. Aynı şartlar altında 30 ºC'de Tr3'de 12.3 U/ml, 30 ºC'de Tm207'de 7.6 U/ml, Tr319'da 8.7 U/ml, Tm321'de 7.4 U/ml olarak elde edildi. Elde ettiğimiz sonuçlar, keratinolitik funguslar olan dermatofitlerin sahip oldukları proteazın önemli oranda olduğu ve patojenitede potansiyel olarak önemli bir virulans faktör oluşturdukları kanısını oluşturmuştur.