Investigation of mdm2 gene expression changes in peripheral blood lymphocytes after in-vitro gamma radiation exposure

İn vitro gama radyasyon maruziyeti sonrası periferal kan lenfositlerinde mdm2 gen ekspresyon değişikliğinin araştırılması

Abstract

gene and destroys the p53 with E3 ubiquitin ligase activation. In this study, effect of DNA damage caused by different in vitro gamma radiation doses in peripheral human lymphocytes on MDM2 gene expression was investigated. Material and Methods: Gene expression changes were evaluated with quantitative real time polymerase chain reaction (QRT PCR) using B2M as a reference gene. For this reason, whole blood samples of ten young, healthy and non-smoking donors were collected. The first tube of the blood samples which were divided in five tube for each individual, was used as control and other four tubes were irradiated using a constant gamma irradiation source (60Co) giving the doses of 0.5 Gy, 1 Gy and 3 Gy, which were calculated according to dose rate of 0,0327 kGy/h. Results: Results were expressed in terms of the threshold cycle value (CT) in REST 2009 (Relative Expression Software Tool V. 2.0.13) program and the difference between the CT values of the target gene and the reference gene was calculated. Conclusions: QRT PCR results showed that MDM2 gene was up-regulated after radiation exposure. The results of the present study suggest that MDM2 gene can be used to determine the effects of exposure to ionized radiation.

Özet

Amaç: Murine double minute 2 (MDM2) p53 tümör baskılayıcı genini negatif olarak kontrol altında tutar ve E3 ubikitin ligaz aktivitesi ile p53′ü yıkar. Bu çalışmada insan periferal lenfositlerinde in vitro olarak farklı gama radyasyon dozlarından meydana gelen DNA hasarının MDM2 gen seviyesine etkisi araştırılmıştır. Gereç ve Yöntem: Gen ekspresyon değişiklikleri, B2M referans gen olarak kullanılarak kantitafif real time polimeraz zincir reaksiyonu ile (KRT PZR) değerlendirilmiştir. Bu amaçla genç, sağlıklı ve sigara içmeyen 10 kişiye ait kan örnekleri toplanmıştır. Her birey için beş tüpe bölünen örneklerden ilki kontrol olarak ayrılmış diğer dördü sabit gama kaynağında (Co60) 0327 kGy/sa doz hızına göre hesaplanmış 0.5 Gy, 1 Gy ve 3 Gy gama radyasyonuna maruz bırakılmıştır. Bulgular: Sonuçlar eşik değerinin aşıldığı döngü değerlerine (CT) göre REST 2009 (Relative Expression Software Tool V. 2.0.13 ) programında değerlendirilmiş, hedef genin ve referans genin CT değerleri arasındaki farklılıklara göre hesaplanmıştır. Sonuç: KRT PZR sonuçları MDM2 geninin maruz kalınan dozlarda up-regüle olduğunu göstermiştir. Elde edilen sonuçlar MDM2 geninin iyonize radyasyonun etkilerinin değerlendirilmesinde kullanılabileceğini göstermiştir.