Determination of iNOS and PARP immunoreactivity in rats kidney tissues with experimentally induced diabetes

Deneysel diyabet oluşturulan sıçan böbrek dokularındaki iNOS ve PARP immunreaktivitelerinin belirlenmesi

Abstract

Objective: Diabetic nephropathy is an important complication of diabetes mellitus. Nitric oxide (NO) is an effective multifunctional mediator for hemodynamic variance in diabetes. PoliADP ribose polymerase (PARP) is an enzyme that has a role in DNA repairing during apoptotic processes. Excessive activation of PARP results in apoptosis. In this study, it was purposed to examine the inducible nitric oxide synthase (iNOS) and PARP immunoreactivities in kidney tissues of experimental diabetic rats induced by Streptozotosin. Materials and Methods: Total of 14 male Wistar Albino rats were used in this study. Rats were divided in to the two groups as group I (Control) and Group II (Diabetes). In the Diabetes group, a single dose of 60 mg/kg STZ, which is dissolved in phosphate-citrate buffer (pH: 4.5) was injected intraperitoneally. All rats in both groups were decapitated under anesthesia and kidney tissues were removed and fixed in 10% formaldehyde solution for light microscopic investigations at the end of the 10 weeks. Paraffin blocks were prepared and 5 μm tissue sections were cut and stained with avidin-biotin peroxidase method to analyse iNOS and PARP immunoreactivities. The severity and prevalance of immunoreactivities were evaluated semiquantitatively by scoring from 0 to +3. Results: In the light microscopic examination, diabetic grup II showed prominent +3 iNOS and PARP immunoreactivity whereas immunoreactivities of control group I were less and +1. Conclusion: Thus, we concluded that iNOS and PARP, influence on apoptotic process, have important contributions on kidney damage in the diabetic group.

Özet

Amaç: Diyabetik nefropati, diabetes mellitusun önemli komplikasyonlarından biridir. Nitrik oksit (NO), diyabetteki hemodinamik değişikliklerde etkili olan çok fonksiyonlu bir mediatördür. Poli ADP riboz polimeraz (PARP) ise apoptotik süreç boyunca DNA tamirinde rol oynayan bir enzimdir. Bu enzimin proteolitik yıkımı DNA onarımını engeller ve apoptozise neden olur. Ancak aşırı aktivasyonuda apoptozis ile sonuçlanmaktadır. Bu çalışmada, Streptozotosin (STZ) ile deneysel diyabet oluşturulan sıçan böbrek dokusunda indüklenebilir nitrik oksit sentaz (iNOS) ve PARP immünreaktivitesinin incelenmesi amaçlanmıştır. Gereç Yöntem: Çalışmada 14 adet erişkin Wistar Albino cinsi erkek sıçan kullanıldı. Sıçanlar grup I (kontrol) ve Grup II (Diyabet) olmak üzere 2 gruba ayrıldı. Diyabet oluşturulan gruba 60 mg/kg tek doz STZ, 0.1 M Fosfat-sitrat tamponunda (pH: 4.5) çözdürülerek intraperitoneal olarak uygulandı. Tüm gruplardaki sıçanlar 10 haftalık deney sonunda anestezi altında dekapite edilip, böbrek dokuları çıkarıldı ve ışık mikroskobik inceleme için %10’luk formaldehitte tepit edildi, parafin bloklar hazırlandı. 5 μm’lik parafin kesitlerde avidin-biyotin peroksidaz metodu uygulanarak iNOS ve PARP immünreaktivitesine bakıldı. İmmünreaktivitenin şiddeti ve yaygınlığı 0’dan +3 ‘e kadar skorlanıp semi-kantitatif olarak değerlendirildi. Bulgular: iNOS ve PARP ekspresyonlarını belirlemek için yapılan immünohistokimyasal boyamanın ışık mikroskopik incelemesinde; iNOS ve PARP immünreaktivitesi kontrol grubunda +1 yaygınlığında iken diyabetik grupta, kontrol grubuyla kıyaslandığında oldukça yoğun idi ve +3 şiddet ve yaygınlığında tesbit edildi. Sonuç: Bu çalışma ile diyabetik grup böbrek dokularındaki hasarlanmaya, apoptozis sürecinde etkili olan iNOS ve PARP’ın önemli bir katkı sağladığı kanaatine varılmıştır.