Effect of Cilostazol on KCl and Capsaicin Induced Increase in Intracellular Calcium Signaling in Rat Sensory Neurons

Sıçan Duyusal Nöronlarında KCl ve Kapsaisin ile İndüklenen Hücre İçi Kalsiyum Cevapları Üzerinde Silostazolun Etkisi

Abstract

Objective: Cilostazol, a specific cAMP phosphodiesterase III inhibitor, is used for medical treatment of intermittent claudication in peripheral artery disease to prevent leg pain during physical activity. Dorsal root ganglion (DRG) neurons are eligible experimental model for pain investigations. Aim of this study was to figure out the effect of cilostazol on intracellular calcium ([Ca2+]i) signaling in cultured rat DRG neurons. Materials and Methods: DRG neurons were grown in primary culture following enzymatic and mechanical dissociation of ganglia from 2-day-old Wistar rats. DRG neuronal cultures were loaded with 1?mol Fura-2AM and [Ca2+]i responses to stimulation were assessed by using fluorescent ratiometry. Cultured cells were excited at 340 and 380nm and emission was recorded at 510nm. Responses were determined by the change in 340/380 ratio (basal-peak) for individual neurons. After basal recordings, KCl (30mM) and capcaicin (1?M) applied to medium for induction of [Ca2+]i. Cilostazol treated alone or co-administered with KCl and capcaicin for determining the possible changes in calcium signaling in small size DRG neurons. Data were analyzed by using Student's t test, P level of

Özet

Amaç: Silostazol, spesifik cAMP fosfodiesteraz III inhibitorü olmakla birlikte medikal olarak bir periferik arter hastalığı olan intermitan klodikasyon tanılı hastalarda fiziksel aktivite esnasında bacakta meydana gelen ağrının giderilmesinde kullanılmaktır. Bu çalışmanın amacı, ağrı çalışmaları için uygun bir deneysel model olan sıçan dorsal kök gangliyonlarında (DKG) silostazolun hücre içi kalsiyum ([Ca+2]i) düzeyi üzerindeki etkisini belirlemekti. Gereç ve Yöntem: DKG nöronları 2 günlük Wistar cinsi sıçanlardan çeşitli enzimatik ve mekanik uygulamalarla elde edildi. DKG nöronları 1 ?mol Fura-2 AM boyasıyla boyanarak [Ca+2]iseviyesindeki değişimler oransal florasan yöntemle tespit edildi. Kültürde bulunan hücreler 340380 nm dalga boyunda uyarılıp 510 nm dalga boyunda kayıt yapıldı. Her bir nöronun 340/380 (bazal- pik) oranında bazal kalsiyum seviyesi tespit edildikten sonra kültür ortamına KCl (30 mM) ve kapsaisin (1 ?M) uygulandı. Silostazol tek başına veya KCl (30 mM) ve kapsaisin (1?M) ile birlikte kültür ortamına uygulanmasıyla küçük çapa sahip DKG nöronlarında meydana gelen [Ca+2]i değişimi incelendi. Elde edilen veriler Student's t-testi kullanılarak istatiksel olarak değerlendirildi ve P