Development and Validation of a Fast and Simple LC-ESI MS/MS Method for Quantitative Analysis 8-Hydroxyl-2′-Deoxyguanosine (8-OHdG) in Human Urine

İnsan İdrarında 8-Hidroksil-2′-Deoksiguanozin (8-OHdG) Kantitatif Analizi için Hızlı ve Basit LC-ESI MS/MS Yöntemi Geliştirilmesi ve Doğrulanması

Abstract

8-Hydroxyl-2′-Deoxyguanosine (8-OHdG) is an extensivelyused biomarker of oxidative DNA damage, which is formed byoxidative stress factors such as chemical carcinogens, cigarettesmoke. The main aim of this study was to develop a fast,sensitive and easy method for the quantitative determination of8-OHdG in human urine samples. In this study, we developedand validated an accurate, fast, sensitive, and robust liquidchromatography–tandem mass spectrometry (LC–MS/MS)method for determination of 8-OHdG concentrations in humanurine samples. The levels of the 8-OHdG in urine samples weredetermined quantitatively with LC-MS/MS by using positiveelectrospray ionization (ESI) in the multiple reaction monitoring(MRM) mode and a Hilic Plus column. 8-Hydroxy-2’-Deoxyguanosine [15N5, 98%] was used as an internal standardin this study. Our validated method was successfully appliedto the analysis of spot urine samples collected from randomlyselected healthy human cigarette smoker and non-smoker subjects.With the help of this validated LC-ESI MS/MS method we candetermine the presence of 8-OHdG at very low concentrations inhuman urine samples.

Özet

8-Hidroksil-2′-Deoksiguanozin (8-OHdG), oksidatif DNA hasarının yaygın olarak kullanılan bir biyolojik belirleyicisi olup, kimyasal kanserojenler, sigara dumanı gibi oksidatif stres faktörlerine bağlı olarak oluşur. Bu çalışmanın amacı, insan idrarında 8-OHdG’nin kantitatif analizi için hızlı, hassas ve basit bir prosedür geliştirmektir. Bu çalışmada, insan idrarında 8-OHdG konsantrasyonlarını ölçmek için doğru, hızlı, hassas ve sağlam bir sıvı kromatografisi-tandem kütle spektrometresi (LC-MS/MS) metodu geliştirilmiş ve valide edilmiştir. İdrar numunelerindeki 8-OHdG seviyeleri, MRM modunda ve bir Hilic Plus kolonunda pozitif elektrosprey iyonizasyonu kullanılarak LC / ESI-MS / MS ile kantitatif olarak belirlendi. Bu çalışmada iç standart olarak 8-Hidroksi-2’-Deoksiguanozin [15N5,% 98] kullanılmıştır. Doğrulanmış yöntem, rastgele seçilen sağlıklı sigara içen ve sigara içmeyen deneklerden toplanan spot idrar örneklerinin analizine başarıyla uygulanmıştır. Valide edilmiş bu LC-ESI MS / MS metodu yardımıyla insan idrar numunelerinde 8-OHdG varlığı çok düşük seviyelerde tespit edilebilmektedir.