Polihedrin gende iyi korunmuş bölgenin klonlanması ve zincirlenmesi ile bir mısır Spodoptera littoralis nükleopolihedrovirüs'ün karakteristiği

Characterization of an Egyptian Spodoptera littoralis nucleopolyhedrovirus with cloning and sequencing of a highly conserved region from polyhedrin gene

Abstract

Purpose: An Egyptian isolate of Spodoptera littoralis nucleopolyhedrovirus (SpliNPV) was tested for its potential as biocontrol agent in comparison to Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV). Material and Methods: Comparative assays of SpliNPV and AcMNPV against 2nd instar larvae of Spodoptera littoralis revealed 4-fold greater susceptibility of S. littoralis to AcMNPV than to SpliNPV based on LC50 values for the two viruses. The LT50s determined for SpliNPV and AcMNPV using LC50 of the virus against 2nd instar larvae were 4.2 and 5.8 days, respectively. A DNA segment of 405 bp containing highly conserved region from polyhedrin gene of SpliNPV (Polh-cr) was successfully amplified by PCR. Subsequently, this DNA segment was cloned and sequenced. Nucleotide sequence and its deduced amino acid sequence were compared to all available sequences in GenBank. Results: Sequence alignment results revealed that Polh-cr showed significant similarities with 91 different baculovirus isolates. The percentage of homology ranged from 78% for Plusia orichalcea NPV to 99 % for SpliNPV. Conclusion: This highly conserved region provides a candidate that could be used in easy, fast and economic prospective systems for virus detection as well as in biological control strategies.

Özet

Amaç: Bir Mısır Spodoptera littoralis Nucleopolyhedrovirus (SpliNPV) potansiyel biokontrol ajani olabilmesi için Autographa californica (AcMNPV) ile karşılaştırılarak test edildi. Material and Methods: Spodoptera littoralis ikinci dönem lavrasına karşı SpliNPV ve AcMNPV virusünün LC50 değerine dayanan karşılaştırmalı değerlendirmede AcMNPV nın SpliNPV göre dört kat daha büyük duyarlılık gösterdiği ortaya çıkarılmıştır. Spodoptera littoralis ikinci dönem lavrasına karşı SpliNPV ve AcMNPV virusünün yaklaşık LC50 değeri kullanılarak belirlenen LT50 sırasıyla 4.2 ve 5.8 gündür. PCR, SpliNPV nm polyhedrin genin iyi korunmuş bölgesini başarıyla amlifiye etti. 405 bp hk bir DNA geni (Polh-cr) elde edildi. Bundan sonra bu DNA segmenti klonlandi ve zincirlendi. Nükleotid dizilimi ve amino asit dizilimi GenBank ta bütün olabilen dizilimlerle karşılaştırıldı. Bulgular: Polh-cr den üretilen önemli dizilim sonuçları 91 Baculovirus izolatlar ile ilişkilendirildi. Homoloji oranlan Plusia orichalcea NPV için % 78 ve SpliNPV için %99 olarak bulundu. Sonuç:Biyolojik kontrol stratejilerinde virus belirlemek için bu yüksek olarak korunmuş bölgenin kullamlmasi muhtemel kolay, hizh ve ekonomik olarak görülüyor.