Periost kökenli fibroblast benzeri hücreler üzerinde P maddesi alıcılarının gösterilmesi: İn vitro hücre kültürü çalışması

Identification of substance P receptors on fibroblast-like cells derived from the periosteum: An in vitro cell culture study

Abstract

Objectives: Substance P (SP) is a neuromediator that influences development, growth, and formation of bone. Substance P receptors have not been specified on osteoblast-like cells. It is assumed that the neural network within the periosteum may be the site of neuroendocrine control mechanism of bone growth and repair. The aim of this study was to identify SP receptors on fibroblast-like cells derived from the periosteum. Materials and methods: Fibroblast-like cells were derived from the periosteum of six patients who underwent femoral derotation and shortening osteotomy for developmental dislocation of the hip. Periosteal tissue was removed from the osteotomy site and the cells were suspended in cell culture media and grown on 24-well macroplates. Polyclonal SP antibodies were added and anti-rabbit peroxidase conjugate (whole molecule) was used as a second antibody. SP reactive sites on cell surface were screened by addition of substrate (3-amino-9-ethyl carbazole+dimethylformamide + 3% hydrogen peroxide). Surface and/or intracellular staining was evaluated under microscope. Results: Fibroblast-like cells showed immunostaining for SP receptors. The presence of SP-sensitive binding sites were identified on fibroblast-like cells derived from the periosteum. Conclusion: Substance P receptors shown on fibroblast- like cells derived from the periosteum are very likely to have a modulating effect in periosteal bone growth and healing.

Özet

Amaç: P maddesi (SP), kemiğin gelişimi, iyileşmesi ve yeniden şekillenmesinde görev alan sinir kökenli düzenleyicilerdendir. P maddesi alıcıları (reseptörleri) osteoblast benzeri hücreler üzerinde daha önce gösterilmemiştir. Periost içindeki periferik sinir ağının kemiğin büyümesi ve onarılmasını kontrol eden mekanizmalardan biri olduğu öngörülmektedir. Bu çalışma, periost kaynaklı hücre kültüründe, fibroblast benzeri hücrelerde bulunan SP alıcılarını tanımlamak için düzenlendi. Gereç ve yöntem: Fibroblast benzeri hücreler, gelişimsel kalça displazisi nedeniyle rotasyon-kısaltma osteotomisi uygulanan altı hastanın periostlarından elde edildi. Yaklaşık 1.0 cm x 1.5 cm periost dokusu osteotomi bölgesinden alındı. Hücreler kültür otamında 24 hücreli makroplaklarda çoğaltıldı. Makroplaklara poliklonal SP antijenleri eklendi. Anti-tavşan proksidaz konjugatı (tam molekül) ikincil antijen olarak kullanıldı. P maddesine hassas bölgeler substrat (3-amino-9-etil karbazol + dimetilformamide + %3 hidrojen peroksit) kullanılarak işaretlendi. Hücre içi veya üzeri boyanma mikroskopla değerlendirildi. Bulgular: Laboratuvar ortamında gerçekleştirilen bu hücre kültürü çalışmasında, periost kökenli fibroblast benzeri hücrelerin membranlarında P addesine hassas bölgeler saptandı. Sonuç: Periost kökenli fibroblast benzeri hücrelerin üzerinde gösterilen SP alıcıları büyük olasılıkla kemiğin periosteal büyüme ve iyileşme süreçlerinde düzenleyici etkiye sahiptir.