The medium standardization and growth curve determination in Leishmania promastigotes

Leishmania promastigotlarının üretilmesinde kullanılan besiyerlerinin standardizasyonu ve üreme eğrisinin tespiti

Abstract

To find out the most promising one we tried several biphasic media such as classical NNN, enriched McConnel, modified Evans', Brain Heart Infussion agar in 1.2% and 4.7% concentrations, and monophasic medium such as 1x RPMI 1640. Each was inoculated with reference strains of seven. In conclusion, we observed that there is not a common medium which is most productive for all. However, the modified Evans' medium containing 10% rabbit blood for isolation and 1x RPMI 1640 containing 10% Fetal Bovine Serum for biomass production purpose were detected to be promising, the volume of latter was increased in a step-wise manner at programmed intervals. In addition, for the formation of growth curve the L. tropica (K-27) reference strain was used in both classical NNN and 1x RPMI-1640, and cell numbers were calculated at intervals. At the end of growth curve study the conclusions below were emerged that: the cells in log phase were in good conditions for passage and cryopreservation studies. The operation periods for these were 5-6. days of growth in NNN medium and 5-10. days in 1x RPMI 1640 medium.

Özet

Leyişmaniyoz etkenlerinin izolasyon ve kültürlerinin amaca uygun şekilde yapılabildiği besiyerlerini tespit etmek amacıyla; klasik NNN, zenginleştirilmiş McConnel, modifiye Evans bifazik besiyerleri, %1.2 ile %4.7 Brain Heart İnfüzyon agarlı bifazik ve 1x RPMI-1640 gibi monofazik besiyerleri hazırlandı ve her birine belli sayıda olmak üzere yedi referans susun promastigotları ekildi. Bu çalışma sonuçlarına göre, tüm referans suşları olduğu kadar bölgemizdeki kutanöz leyişmaniyoz etkenlerini aynı başarı ile üretebilen bir besiyerinin önerilemeyeceği belirlendi. Ancak izolasyonda; %10 tavşan kanlı modifiye Evans besiyerinin diğerlerinden daha uygun olduğu gözlendi. Çok sayıda hücre elde etmenin de, hacmi kademe kademe arttırılan büyük hacimli ve %10 Fetal bovine serumlu (FBS) 1x RPMI-1640'ta yapılabildiği tespit edildi. Ayrıca üreme eğrisinin tespiti amacıyla L.tropica (K-27) referans suşu, klasik NNN ile 1x RPMI-1640 besiyerlerine ekildi ve belli zaman aralıklarında birim hacme düşen hücre sayısı tespit edildi. Zamana karşı, elde edilen hücre sayısından üreme eğrisi çıkarıldı. Üreme eğrisi sonuçlarına göre, pasajlama ve dondurup muhafaza etme işlemleri için en uygun hücrelerin loğ faz hücreleri olduğu, bunun da NNN besiyerinde 5-6.günlere ve 1x RPMI-1640 besiyerinde 5-10. günlere tekabül ettiği belirlendi.