Amylase Production of Bacillus subtilis Isolated from Soil by SmF Method

Abstract

In our study, the isolation, identification and optimization of Bacillus subtilis from soil samples were performedand the ability to produce α-amylase of industrial importance was investigated. Bacteria identified as B. subtilis by 16SrRNA analysis, morphological and biochemical tests. Maximum growth was determined at 32 hour, 37°C and pH 7.0.Enzyme optimization was performed after determination of bacterial amylase in starchy medium. Optimum conditionsfor amylase production were determined as 37°C, pH 7.0 and 48 h. When the effect of metals on enzyme activity wasexamined, it was determined that Cu2+ increased enzyme activity, Zn2+, Hg2+ and Fe2+ were partially inhibited theenzyme activity, and Ca2+ was showed close activity to the control. It was observed that carbon sources had inhibitoryeffect on bacterial growth and enzyme production.

Özet

Çalışmamızda Ergani Makam Dağı’ndan alınan toprak örneğinden Bacillus subtilis’in izolasyonu, tanımlanması ve optimizasyonu gerçekleştirilerek endüstriyel öneme sahip α-amilaz üretme yeteneği araştırıldı. Morfolojik ve biyokimyasal testler ile 16S rRNA analizi yapılarak B. subtilis olarak tanımlanan bakterinin 32. saat, 37 oC ve pH 7.0’ de maksimum üreme gösterdiği tespit edildi. Nişastalı besiyerinde bakterinin amilaz ürettiği tespit edildikten sonra enzim optimizasyonu yapıldı. Amilaz üretimi için optimum koşullar 37 oC, pH 7.0 ve 48. saat olarak belirlendi. Enzim aktivitesi üzerine metallerin etkisi incelendiğinde Cu+2’ nın enzim aktivitesini artırdığı, Zn+2, Hg+2 ve Fe+2 enzim aktivitesini kısmen inhibe ettiği, Ca+2 ise kontrole yakın bir değer gösterdiği görüldü. Karbon kaynaklarının bakteri gelişimi ve enzim üretimi üzerine inhibisyon etkisi yaptığı gözlendi.