The effect of DNase I on free DNAs and its relationship with metastasis: A preliminary results

DNase I 'in serbest DNAlar üzerine etkisi ve metastaz ile ilişkisi: İlk sonuçlar

Abstract

In breast cancer, p53 is generally mutant and plays an important role in the development of metastasis, including bone metastasis. However, mutations are not always responsible for regulation disorders in cancer-related genes. Epigenetic changes such as hyper-methylation-related gene silencing errors and chromatin remodeling in CpG islands contribute to the development of cancer and metastasis. Free DNAs play an important role in cancer and metastasis formation. Studies show that DNA fragment levels are low in normal conditions and an increase in malignancy. In our study, invasive breast cancer cells MDA-MB-231 and hFOB 1.19 cells representing bone tissue, which is one of the most metastasized tissues of breast cancer, were cultured in the same environment (co-culture). In both cells, the presence of hypermethylation in the mutant p53 exon 8 region and APC1A, APC1B, and RASSF1 genes in MDA-MB-231 cells was observed. Appropriate primer sequences were selected for p53 exon8 amplifications and APC1A, APC1B, and RASSF1A methylation analysis. After PCR treatment applied for mutant p53 exon8 determinations, the products were subjected to electrophoresis in a 30% homogeneous polyacrylamide gel. Methylation Specific PCR (MSP) was performed by the APC1A, APC1B, and RASSF1A gene regions. PCR products were analyzed by conducting 2% agarose gel electrophoresis. The results were also evaluated in environments where DNase I was added. The results of our study provide researchers with a model that shows that some gene and structural features of tumor cells can be transported to normal cells via free DNA. Also, it is aimed to reveal the effect of DNase I in providing or preventing this transport.

Özet

Meme kanserinde p53 genellikle mutanttır ve kemik metastazı da dahil olmak üzere metastaz gelişiminde önemli bir rol oynar. Bununla birlikte, mutasyonlar kansere bağlı genlerdeki regülasyon bozukluklarından her zaman sorumlu değildir. CpG adalarında hipermetilasyonla ilişkili gen susturma hataları ve kromatin yeniden modellenmesi gibi epigenetik değişiklikler, kanser ve metastaz gelişimine katkıda bulunur. Serbest DNA'lar kanser ve metastaz oluşumunda önemli bir rol oynar. Çalışmalar, DNA fragment seviyelerinin normal koşullarda düşük olduğunu ve malignitede arttığını göstermektedir. Çalışmamızda, meme kanserinin metastaz yapma eğiminde olduğu dokularından biri olan kemik dokusunu temsil eden hFOB 1.19 hücreleri ile invaziv meme kanser hücreleri MDA-MB-231 aynı ortamda kültüre edilmiştir (ko-kültür). Her iki hücrede de, mutant p53 ekson 8 bölgesinde hipermetilasyon ve MDA-MB-231 hücrelerinde APC1A, APC1B ve RASSF1 genlerinin varlığı gözlendi. P53 ekson8 amplifikasyonları ve APC1A, APC1B ve RASSF1A metilasyon analizi için uygun primer sekansları seçildi. Mutant p53 ekson8 saptamaları için PCR işleminden sonra, ürünler %30 homojen bir poliakrilamid jel içinde elektroforeze tabi tutuldu. APC1A, APC1B ve RASSF1A gen bölgelerinde, Metilasyon Spesifik PCR (MSP) işlemi gerçekleştirildi. PCR ürünleri %2 agaroz jel elektroforezi yapılarak analiz edildi. Sonuçlar DNase I'in eklendiği ortamlarda da değerlendirildi. Çalışmamız araştırmacılara, tümör hücrelerinin bazı genlerinin ve yapısal özelliklerinin, serbest DNA yoluyla normal hücrelere taşınabileceğini gösteren bir model sunmaktadır. Ayrıca, DNase I'in bu taşınmayı sağlama veya önlemedeki etkisini ortaya koymaktadır.